一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準? GB15979-2002

前??言

本標準全文強制

GB15979-1995《一次性使用衛(wèi)生 用品衛(wèi)生標準》自1996年發(fā)布以來，使生產(chǎn)企業(yè)明確了衛(wèi)生要求和目標，管理部門 也有了監(jiān)督檢測依據(jù)，對推動該行業(yè)的健康發(fā)展與衛(wèi)生水平的提高起到了積極作用。與此同時，隨著產(chǎn)品種類與材料的發(fā)展，該標準有一些地方需要完善。因此提出修訂本標準。

本標準自實施之日起代替GB1579-1995.

本標準的附錄A至附錄G為標準的附錄。

本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出。

本標準負責(zé)起草單位：上海市疾病預(yù)防控制中心；參加起草單位：寶潔（中國）有限公司、強生（中國）有限公司。

本標準主要起草人：沈偉、盧敏、楊宏平、周密、潘希和、劉育京。

中華人民共和國國家標準

???????????一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準? GB15979-2002

Hygienic standard for disposable sanitary products????代替GB15979-1995

 

 

1、范圍

本標準規(guī)定了一次性使用衛(wèi)生用品的產(chǎn)品和生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生標準、消毒效果生物監(jiān)測評價標準和相應(yīng)檢驗方法，以及原材料與產(chǎn)品生產(chǎn)、消毒、貯存、運輸過程衛(wèi)生要求和產(chǎn)品標識要求。

在本標準中，一次性使用衛(wèi)生用品是指：

本標準使用與國內(nèi)從事一次性使用衛(wèi)生用品的生產(chǎn)與銷售的部門、單位或個人，也適用于經(jīng)銷進口一次性使用衛(wèi)生用品的部門、單位或個人。

2、引用標準

下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的個方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。

GB 15981-1995????消毒與滅菌效果的評價方法與標準

3、定義

本標準采用下列定義。

一次性使用衛(wèi)生用品

使用一次后即丟棄的、與人體直接或間接接觸的、并為達到人體生理衛(wèi)生或衛(wèi)生保健（抗菌或抑菌）目的而使用的各種日常生活用品，產(chǎn)品性狀可以是固體也可以使液體。例如，一次性使用手套或指套（包括衛(wèi)生護墊）、尿布等排泄物衛(wèi)生用品（不包括走穩(wěn)衛(wèi)生紙等廁所用紙）、避孕套等，在本標準中統(tǒng)稱為“衛(wèi)生用品”。

4、產(chǎn)品衛(wèi)生指標

4.1??外觀必須整潔，符合該衛(wèi)生用品固有性狀，不得有異常氣味與異物。

4.2??不得對皮膚與粘膜產(chǎn)生不良刺激與國民反應(yīng)及其他損害作用。

4.3 ?產(chǎn)品須符合表1中微生物學(xué)指標。

表1

產(chǎn)品種類	微生物指標
	初始污染菌1) cfu/g	細菌菌落總數(shù)cfu/g或cfu/mL	大腸菌群	致病性化膿菌2）	真菌菌落總數(shù)cfu/g或cfu/mL
手套或指套、紙巾、濕巾、內(nèi)褲、電話膜 抗菌（或抑菌）液體產(chǎn)品 衛(wèi)生濕巾 口罩 ??普通級 ??消毒級 婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品 ??普通級 ??消毒級 尿布等排泄物衛(wèi)生用品 ??普通級 ??消毒級 避孕套	≤10000 ≤10000 ≤10000	≤200 ≤200 ≤20 ≤200 ≤20 ≤200 ≤20 ≤200 ≤20 ≤20	不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出	不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出 不得檢出	≤100 ≤100 不得檢出 ≤100 不得檢出 ≤100 不得檢出 ≤100 不得檢出 不得檢出
?? ?1）如初識污染菌超過表內(nèi)數(shù)值，應(yīng)相應(yīng)提高殺滅指數(shù)使達到本標準規(guī)定的細菌與真菌限值。 ??? 2）致病性化膿菌指綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球菌。

4.4??衛(wèi)生濕巾除必須達到表1中的微生物學(xué)標準外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺滅率須≥90%，如需標明對真菌的作用，還須對白色念珠菌的殺滅率≥90%，其殺菌作用在室溫下至少須保持1年。

4.5??抗菌（或抑菌）產(chǎn)品出必須達到表1中的同類同級產(chǎn)品微生物學(xué)標準外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率須≥50%（溶出性）或＞26%（非溶出性），如需標明對真菌的作用， 還須白色念珠菌的抑菌率≥50%（溶出性）或＞26%（非溶出性），其抑菌作用在室溫下至少須保持1年。

4.6??任何經(jīng)環(huán)氧乙烷消毒的衛(wèi)生用品出廠時，環(huán)氧乙烷殘留量必須≤250ug/g。

5、生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標

5.1??裝配與包裝車間空氣中細菌菌落總數(shù)應(yīng)≤2500cfu/m³.

5.2??工作臺表面細菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/cm².

5.3??工人手表面細菌菌落總數(shù)應(yīng)≤300cfu/只手，并不得檢出致病菌。

6、消毒效果生物監(jiān)測評價

6.1??環(huán)氧乙烷消毒：對枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC 9372）的殺滅指數(shù)≥10³.

6.2??電離輻射消毒：對短小桿菌芽胞E6d（ATCC 27142）的殺滅指數(shù)應(yīng)≥10³.

6.3??壓力蒸汽消毒：對嗜熱脂肪桿菌（ATCC 7953）的殺滅指數(shù)應(yīng)≥10³.

7、測試方法

7.1??產(chǎn)品測試方法

7.1.1??產(chǎn)品外觀：目測，應(yīng)符合本標準3.1的規(guī)定。

7.1.2??產(chǎn)品毒理學(xué)測試方法：見附錄A。

7.1.3??產(chǎn)品微生物檢測方法：見附錄B。

7.1.4??產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性測試方法：見附錄C。

7.1.5??產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法：見附錄D。

7.2??生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試方法：見附錄E。

7.3??消毒效果生物監(jiān)測評價方法：見附錄F。

8、原材料衛(wèi)生要求

8.1??原材料應(yīng)無毒、無害、無污染；原材料包裝應(yīng)清潔，清楚表明內(nèi)含物的名稱、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期或生產(chǎn)批號；影響衛(wèi)生治療的與原材料應(yīng)不裸露；有特殊要求的原材料應(yīng)標明保存條件和保質(zhì)期。

8.2??對影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的原材料應(yīng)有相應(yīng)檢驗報告或證明材料，必要時需進行微生物監(jiān)控和采取相應(yīng)措施。

8.3??禁止使用廢棄的衛(wèi)生用品作原材料或半成品。

9??生產(chǎn)環(huán)境與過程衛(wèi)生要求

9.1??生產(chǎn)區(qū)周圍環(huán)境應(yīng)整潔，無垃圾，無蚊、蠅等害蟲孳生地。

9.2??生產(chǎn)區(qū)應(yīng)有足夠空間滿足生產(chǎn)需要，布局必須符合生產(chǎn)工藝要求，分割合理，人、物分流，產(chǎn)品流程中無逆向與交叉。原料進入與成品出去應(yīng)有防污染措施和嚴格的操作規(guī)程，減少生產(chǎn)環(huán)境微生物污染。

9.3??生產(chǎn)區(qū)內(nèi)應(yīng)配置有效的防塵、防蟲、防鼠措施，地面、墻面、工作臺面應(yīng)平整、光滑、不起塵、便于除塵與清洗消毒，有充足的照明與空氣消毒或凈化措施，以保證生產(chǎn)環(huán)境滿足本標準第5章的規(guī)定。

9.4??配置必需的生產(chǎn)和質(zhì)檢設(shè)備，有完整的生產(chǎn)和質(zhì)檢記錄，切實保證產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量。

9.5??生產(chǎn)過程中使用易燃、易爆物品或產(chǎn)生有害物質(zhì)的，必需具備相應(yīng)安全防護措施，符合國家有關(guān) 標準或規(guī)定。

9.6??原材料和成品應(yīng)分開堆放，待檢、合格、不合格原材料和成品應(yīng)嚴格分開堆放并設(shè)明顯標志。倉庫內(nèi)應(yīng)干燥、清潔、通風(fēng)，設(shè)防蟲、防鼠設(shè)施和墊倉板，符合產(chǎn)品保存條件。

9.7??進入生產(chǎn)區(qū)要換工作衣和工作鞋，戴工作帽，直接接觸裸裝產(chǎn)品的人員需戴口罩，清洗和消毒雙手或戴手套；生產(chǎn)區(qū)前應(yīng)相應(yīng)設(shè)有更衣室、洗手池、消毒池與緩沖區(qū)。

9.8??從事衛(wèi)生用品生產(chǎn)的人員應(yīng)保持個人衛(wèi)生，不得留指甲，工作時不得戴首飾，長發(fā)應(yīng)卷在工作帽內(nèi)。痢疾、傷寒、病毒性肝炎、活動性肺結(jié)核、尖銳濕疣、淋病及化膿性或滲出性皮膚病患者或病院攜帶者不得參與直接與產(chǎn)品接觸的生產(chǎn)活動。

9.9??從事衛(wèi)生用品生產(chǎn)的人員應(yīng)在上崗前及定期（每年一次）進行健康檢查與衛(wèi)生知識（包括生產(chǎn)衛(wèi)生、個人衛(wèi)生、有關(guān)標準與規(guī)范）培訓(xùn)，合格者方可上崗。

10、消毒過程要求

10.1??消毒級產(chǎn)品最終消毒必須采用環(huán)氧乙烷、電離輻射或壓力蒸汽等有效消毒方法。所用消毒設(shè)備必須符合有關(guān)衛(wèi)生標準。

10.2??根據(jù)產(chǎn)品衛(wèi)生標準、 初始污染菌與消毒效果生物監(jiān)測評價標準制定消毒程序、技術(shù)參數(shù)、工作制度，經(jīng)驗證后嚴格按照既定的消毒工藝操作。該消毒程序、技術(shù)參數(shù)或影響消毒效果的原材料或生產(chǎn)工藝發(fā)生變化后應(yīng)重新驗證確定消毒工藝。

10.3??每次消毒過程必須進行相應(yīng)的工藝（物理）和化學(xué)指示劑監(jiān)測，每月用相應(yīng)的生物指示劑監(jiān)測，只有當工藝監(jiān)測、化學(xué)監(jiān)測、生物監(jiān)測達到規(guī)定要求時，被消毒物品才能出廠。

10.4??產(chǎn)品經(jīng)消毒處理后，外觀與性能應(yīng)與消毒處理前無明顯可見的差異。

11、包裝、運輸與貯存要求

11.1??執(zhí)行衛(wèi)生用品運輸或貯存的單位或個人，應(yīng)嚴格按照生產(chǎn)者提供的運輸與貯存要求進行運輸或貯存。

11.2??直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料必須無毒、無害、清潔，產(chǎn)品的所有包裝材料必須具有足夠的密封性和牢固性以達到保證產(chǎn)品在正常的運輸與貯存條件下不受污染的目的。

12、產(chǎn)品標識要求

12.1??產(chǎn)品標識應(yīng)符合《中華人民共和國產(chǎn)品質(zhì)量法》的規(guī)定，并在產(chǎn)品包裝上標明執(zhí)行的衛(wèi)生標準號以及生產(chǎn)日期和保質(zhì)期（有效期）或生產(chǎn)批號和限定使用日期。

12.2??消毒級產(chǎn)品還應(yīng)在銷售包裝上注明“消毒級”字樣以及消毒日期和有效期或消毒批號和限定使用日期，在運輸包裝上標明“消毒級”字樣以及消毒單位與地址、消毒方法、消毒日期和有效期或消毒批號和限定使用日期。

附??錄?A

（標準的附錄）

產(chǎn)品毒理學(xué)測試方法

A1??各類產(chǎn)品毒理學(xué)測試指標

當原材料、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化可能影響產(chǎn)品毒性時，應(yīng)按表A1根據(jù)不同產(chǎn)品種類提供有效的（經(jīng)政府認定的第三方）成品毒力學(xué)測試報告。

表A1

產(chǎn)品種類	皮膚刺激試驗	陰道粘膜刺激試驗	皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗
手套或指套、內(nèi)褲	√		√
抗菌（或抑菌）液體產(chǎn)品	√	根據(jù)用途選擇1）	√
濕巾、衛(wèi)生濕巾	√	根據(jù)用途選擇1）	根據(jù)材料選擇
口罩	√
婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品		√	√
尿布等排泄物衛(wèi)生用品	√		√
避孕套		√	√
??? 1）用于引導(dǎo)粘膜的產(chǎn)品須做引導(dǎo)粘膜刺激試驗，但無須做皮膚刺激試驗。

A2??試驗方法

皮膚刺激試驗、引導(dǎo)粘膜刺激試驗和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗方法按衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（第三版）第一分冊《實驗技術(shù)規(guī)范》（1999）中的“消毒劑毒理學(xué)實驗技術(shù)”中相應(yīng)的試驗方法進行。

固體產(chǎn)品的樣品制備方法按照A3進行。

注

1、用于皮膚刺激試驗中的空白對照應(yīng)為：生理鹽水和斑貼紙。

2、在皮膚變態(tài)反應(yīng)中，致敏處理和激發(fā)處理所用的劑量保持一致。

A3??樣品制備

A3.1??皮膚刺激試驗和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗

以橫斷方式剪一塊斑貼大小的產(chǎn)品。對于干的產(chǎn)品，如尿布、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品，用生理鹽水潤濕后貼到皮膚上，再用斑貼紙覆蓋。

A3.2??引導(dǎo)粘膜刺激試驗

A3.2.1??干的產(chǎn)品（如婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品）

以橫斷方式剪取足夠量的產(chǎn)品，按1g/10mL的比例加入滅菌生理鹽水，密封于萃取容器中攪拌后置于37℃±1℃下放置24h。冷卻到室溫，攪拌后析取樣液備檢。

A3.2.2??濕的產(chǎn)品（如衛(wèi)生濕巾）

在進行陰道粘膜刺激試驗的當天，擠出濕巾里的添加液作為試樣。

A4??判定標準

以衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（第三版）第一分冊《試驗技術(shù)規(guī)范》（1999）中“毒理學(xué)試驗結(jié)果的最終判定”的相應(yīng)部分作為試驗結(jié)果判定原則。

 

附錄B

（標準的附錄）

產(chǎn)品微生物檢測方法

B1??產(chǎn)品采集與樣品處理

于同一批號的三個運輸包裝中至少抽取12個最小銷售包裝樣品，1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣，另1/2樣品（可就地封存）必要時用于復(fù)檢。抽樣的最小銷售包裝不應(yīng)有破裂，檢驗前不得啟開。

在100級凈化條件下用無菌方法打開用于檢測的至少3個包裝，從每個包裝中取樣，準確稱取10g±1g樣品。剪碎后加入到200mL滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到一個生理鹽水樣液。液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。

如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導(dǎo)致不能吸出足夠樣液時，稀釋液量可按每次50mL遞增，直至能吸出足夠測試用樣液。在計算細菌菌落總數(shù)與真菌菌落總數(shù)時相應(yīng)調(diào)整稀釋度。

B2??細菌菌落總數(shù)與初始污染菌檢測方法

本方法適用于產(chǎn)品初始污染菌與細菌菌落總數(shù)（以下統(tǒng)稱為細菌菌落總數(shù)）檢測。

B2.1??操作步驟

待上述生理鹽水 樣液自然沉降后取上清液做菌落計數(shù)。共接種5個平皿，每個平皿中加入1mL樣液，然后用冷卻至45℃左右的融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15-20mL倒入每個平皿內(nèi)混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置35℃±2℃培養(yǎng)48h后，計算平板上的菌落數(shù)。

B2.2??結(jié)果報告

菌落呈片狀生長的平板不宜采用；計數(shù)符合要求的平板上的菌落，按式（B1）計算結(jié)果：

式中：X₁——細菌菌落總數(shù)，cfu/g或cfu/mL；

????? A——5塊瓊脂培養(yǎng)基本版上的細菌菌落總數(shù)；

????? K——稀釋度。

當菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于100時才有二位有效數(shù)字。

如果樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，按B2.3進行復(fù)檢和結(jié)果報告。

B2.3??復(fù)檢方法

將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測2次，2次結(jié)果平均值都達到本標準的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結(jié)果平均值超過本標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。

B3??大腸菌群檢測方法

B3.1??操作步驟

取樣液5mL，接種50mL乳糖膽鹽發(fā)酵管，置35℃±2℃培養(yǎng)24h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為大腸菌群陰性。

如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板，置35℃±2℃培養(yǎng)18-24h，觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。

取疑似菌落1-2個作革蘭氏染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管，置35℃±2℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)氣情況。

B3.2??結(jié)果報告

凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無芽孢桿菌，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。

B4??綠膿桿菌檢測方法

B4.1??操作步驟

取樣液5mL，加入到50mL SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置35℃±2℃培養(yǎng)18-24h。如有綠膿桿菌生長，培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板，置35℃±2℃培養(yǎng)18-24h，觀察菌落特征。綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不長。

取可疑菌落涂片作革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進行下列試驗。

氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，30s內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。

綠膿菌素試驗：取2-3個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面，35℃±2℃培養(yǎng)24h，加入三氯甲烷3-5mL，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲烷呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。

附錄C

（標準的附錄）

產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性測試方法

C1??樣品采集

為使樣品具有良好的代表性，應(yīng)于同一批號三個運輸包裝中至少隨機抽取20件最小銷售包裝樣品，其中5件留樣，5件做抑菌或殺菌性能測試，10件做穩(wěn)定性測試。

C2??試驗菌與菌液制備

C2.1??試驗菌

C2.1.1??細菌：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538），大腸桿菌（8099或ATCC 25922）。

C2.1.2??酵母菌：白色念珠菌（ATCC 10231）

菌液制備：取菌株第3-14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（18-24h），用5mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（一下簡稱PBS）洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用上述PBS稀釋至所需濃度。

C3??殺菌性能試驗方法

該試驗取樣部位，根據(jù)被試產(chǎn)品生產(chǎn)者的說明而確定。

C3.1??中和劑鑒定試驗

進行殺菌性能測試必須通過以下中和劑鑒定試驗。

C3.1.1??試驗分組

??? 1）染菌樣片+5mL PBS

2）染菌樣片+5mL?中和劑

3）染菌對照片+5mL?中和劑

4）樣片+5mL?中和劑+染菌對照片

5）染菌對照片+5mL PBS

6）同批次PBS

7）同批次中和劑

8）同批次培養(yǎng)基

C3.1.2??評價規(guī)定

1）第1組無試驗菌，或僅有極少數(shù)試驗菌菌落生長。

2）第2組有較第1組為多，但較第3、4、5組為少的試驗菌落生長，并符合要求。

3）第3、4、5組有相似量試驗菌生長，并在1*10⁴-9*10⁴cfu/片之間，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%。

4）第6-8組無菌生長。

5）連續(xù)3次試驗取得合格評價。

C3.2??殺菌試驗

C3.2.1??操作步驟

將試驗菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100uL滴于對照樣片上，回收菌數(shù)為1*10⁴-9*10⁴cfu/片）。

取被試樣片（2.0cm*3.0cm）和對照樣片（與試樣同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理）各4片，分成4組置于4個滅菌平皿內(nèi)。

取上述菌懸液，分別在每個被試樣片和對照樣片上滴加100uL，均勻涂布，開始計時，作用2、5、10、20min，用無菌鑷分別將樣片投入含5mL相應(yīng)中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2-3個稀釋度，分別吸取0.5mL，置于兩個平皿，用涼至40-45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15mL作傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35℃±2℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），做活菌菌落計數(shù)。

試驗重復(fù)3次，按式（C1）計算殺菌率：

?????????? X₃?=?（A-B）/A *100% ? ?（C1)

式中：X₃——殺菌率，%；

?????? A——對照樣品平均菌落數(shù)；

?????? B——被使樣品平均菌落數(shù)。

C3.2.2?評價標準

殺菌率≥90%，產(chǎn)品有殺菌作用。

C4??溶出性抗（抑）菌產(chǎn)品抑菌性能試驗方法

C4.1??操作步驟

將試驗菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100uL滴于對照樣片上或5mL樣液內(nèi)，回收菌數(shù)為1*10⁴-9*10⁴cfu/片或mL）。

取被試樣片（2.0cm*3.0cm）或樣液（5mL）和對照樣片或樣液（與試樣同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理）各4片（置于滅菌平皿內(nèi)）或4管。

取上述菌懸液，分別在每個被試樣片或樣液和對照樣片或樣液上或內(nèi)滴加100uL，均勻涂布/混合，開始計時，作用2、5、10、20min，用無菌鑷分別將樣片或樣液（0.5mL）投入含5mL PBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2-3個稀釋度，分別吸取0.5mL，置于兩個平皿，用涼至40-45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15mL作傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35℃±2℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），做活菌菌落計數(shù)。

試驗重復(fù)3次，按式（C2）計算抑菌率

????????? X_4?= ( A-B ) / A * 100 ? ?（C2)

式中：X₄——抑菌率，%；

?? A——對照樣品平均菌落數(shù)；

?? B——被試樣品平均菌落數(shù)。

C4.2??評價標準

抑菌率≥50%-90%，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率≥90%，產(chǎn)品有較強抑菌作用。

C5??非溶出性抗（抑）菌產(chǎn)品抑菌性能試驗方法

C5.1??操作步驟

稱取被試樣片（剪成1.0cm*1.0cm大小）0.75g分裝包好。

將0.75g重樣片放入一個250mL的三角燒瓶中，分別加入70mL PBS和5mL菌懸液，使菌懸液在PBS中的濃度為1*10⁴-9*10⁴cfu/ mL。

將三角燒瓶固定于振蕩搖床上，以300r/min振搖1h。

取0.5mL振搖后的樣液，或用PBS做適當稀釋后的樣液，以瓊脂傾注法接種平皿，進行菌落計數(shù)。

同時設(shè)對照樣片組和不加樣片組，對照樣片組的對照樣片與被試樣片同樣大小但不含抗菌成分，其他操作程序均與被試樣片組相同，不加樣片組分別取5mL菌懸液和70mL PBS加入一個250mL三角燒瓶中，混勻，分別于0時間和振蕩1h后，各取0.5mL菌懸液與PBS的混合液做適當稀釋，然后進行菌落計數(shù)。

試驗重復(fù)3次，按式（C3）計算抑菌率：

???? X₅?=?（A ? B）/A * 100% ? ? ??(C3)

式中：?X₅——抑菌率，%；

??????? A——被試樣品振蕩前平均菌落數(shù)；

??????? B——被試樣品振蕩后平均菌落數(shù)。

C5.2??評價標準

不加樣片組的菌落數(shù)在1*10⁴-9*10⁴cfu/ mL之間，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10%以內(nèi)，試驗有效；被試樣片組抑菌率與對照樣片組抑菌率的差值＞26%，產(chǎn)品具有抗菌作用。

C6??穩(wěn)定性測試方法

C6.1??測試條件

C6.1.1??自然留樣：將原包裝樣品置室溫下至少1年，每半年進行抑菌或殺菌性能測試。

C6.1.2??加速試驗：將原包裝樣品置54-57℃恒溫箱內(nèi)14天或37-40℃恒溫箱內(nèi)3個月，保持相對濕度＞75%，進行抑菌或殺菌性能測試。

C6.2??評價標準

產(chǎn)品經(jīng)自然留樣，其殺菌率或抑菌率達到附錄C3或附錄C4、附錄C5中規(guī)定的標準值，產(chǎn)品的殺菌或抑菌作用在室溫下的保持時間即為自然留樣時間。

產(chǎn)品經(jīng)54℃加速試驗，其殺菌率或抑菌率達到附錄C3或附錄C4、附錄C5中規(guī)定的標準值，產(chǎn)品的殺菌或抑菌作用在室溫下至少保持一年。

產(chǎn)品經(jīng)37℃加速試驗，其殺菌率或抑菌率達到附錄C3或附錄C4、附錄C5中規(guī)定的標準值，產(chǎn)品的殺菌或抑菌作用在室溫下至少保持二年。

附錄D

（標準的附錄）

產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法

D1??測試目的

確定產(chǎn)品消毒后啟用時間，當新產(chǎn)品或原材料、消毒工藝改變可能影響產(chǎn)品理化性能時應(yīng)予測試。

D2??樣品采集

環(huán)氧乙烷消毒后，立即從統(tǒng)一消毒批號的三個大包裝中隨機抽取一定量小包裝樣品，采樣量至少應(yīng)滿足規(guī)定所需測定次數(shù)的量（留一定量在必要時進行復(fù)測用）。

分別于環(huán)氧乙烷消毒后24h及以后每隔數(shù)天進行殘留量測定，直至殘留量降至本標準4.6所規(guī)定的標準值以下。

D3??儀器與操作條件

儀器：氣相色譜儀、氫焰檢測器（FID）

柱：Choromosorb 101 HP60-80目；玻璃柱長2m，Φ3nm。柱溫：120℃.

檢測器：150℃。

氣化器：150℃。

載氣量：氮氣：35mL/min。

?????????氫氣：35mL/min。

?????????空氣：350mL/min。

柱前壓約為108kPa。

D4.1??標準配制

用100mL玻璃針筒從純環(huán)氧乙烷小鋼瓶中抽取環(huán)氧乙烷標準氣（重復(fù)放空二次，以排除原有空氣），塞上橡皮頭，用10mL針筒抽取上述100mL針筒中純環(huán)氧乙烷標準氣10mL，用氮氣稀釋到100mL（可將10mL標準氣注入到已有90mL氮氣的帶橡皮塞頭的針筒中來完成）。用同樣的方法根據(jù)需要再逐級稀釋2-3次（稀釋1000-10000倍），作三個濃度的標準氣體。按環(huán)氧乙烷小鋼瓶中環(huán)氧乙烷的純度、稀釋倍數(shù)和室溫計算出最后標準氣中的環(huán)氧乙烷濃度。

計算公式如下：

? ? ? ??

式中：c——標準氣體濃度，ug/mL；

?????? k——稀釋倍數(shù)；

?????? t——室溫，℃。

D4.2??樣品處理

至少取2個最小包裝產(chǎn)品，將其剪碎，隨機精確稱取2g，放入萃取容器中，加入5mL去離子水，充分搖勻，放置4h或振蕩30min待用。如被檢樣品為吸水樹脂材料產(chǎn)品，科適當增加去離子水量，以確保至少可吸出2mL樣液。

D4.3??分析

待儀器穩(wěn)定后，在同樣條件下，環(huán)氧乙烷標準氣體各進樣1.0mL，待分析樣品（水溶液）各進樣2uL，每一樣液平行作2次測定。

根據(jù)保留時間定性，根據(jù)峰面積（或峰高）進行定量計算，取平均值。

D4.4??計算

以所進環(huán)氧乙烷標準氣的微克（ug）數(shù)對所得峰面積（或峰高）作環(huán)氧乙烷工作曲線。

以樣品中環(huán)氧乙烷對應(yīng)的峰面積（或峰高）在工作曲線上求得環(huán)氧乙烷的量A（ug），并以式（D2）求得產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷的殘留量。

? ? ? ? ? ? ??

式中：X——產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量，ug/g；

?????? A——從工作曲線中所查得環(huán)氧乙烷量，ug；

????? ?M——所取樣品量，g；

V_（萃）——萃取液體積，mL；

V_（進）——進樣量，mL。

附錄E

（標準的附錄）

生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試方法

E1??空氣采樣與測試方法

E1.1??樣品采集

在動態(tài)下進行。

室內(nèi)面積不超過30m²，在對角線上設(shè)里、中、外三點，里、外點位置距墻1m；室內(nèi)面積超過30m²，設(shè)東、西、南、北、中5點，周圍4點距墻1m。

采樣時，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9cm）置采樣點（約桌面高度），打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5min。

E1.2??細菌培養(yǎng)

在采樣前將準備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置35℃±2℃培養(yǎng)24h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。

將已采集的培養(yǎng)基在6h內(nèi)送實驗室，于35℃±2℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。

E1.3??菌落計算

? ? ? ? ? ? ??

?式中：y₁——空氣中細菌菌落總數(shù)，cfu/m³；

??????? A——平板上平均細菌菌落數(shù)；

??????? S₁——平板面積，cm²；

???????? t——暴露時間，min。

E2??工作臺表面與工人手表面采樣與測試方法

E2.1??樣品采集

工作臺：將經(jīng)滅菌的內(nèi)徑為5cm*5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用一浸有滅菌生理鹽水的棉簽在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。

E2.2??細菌菌落總數(shù)檢測

將已采集的樣品在6h內(nèi)送實驗室，每支采樣管充分混勻后取1mL樣液，放入滅菌平皿內(nèi)，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個樣品平行接種兩塊平皿，置35℃±2℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。

? ? ? ? ? ??

式中：y₂——工作臺表面細菌菌落總數(shù)，cfu/cm²；

?????? A——平板上平均細菌菌落數(shù)；

????? S₂——采樣面積，cm²；

????? y₃——工人手表面細菌菌落總數(shù)，cfu/只手。

E2.3??致病菌檢測

按本標準附錄B進行。

附錄F

（標準的附錄）

消毒效果生物監(jiān)測評價方法

F1??環(huán)氧乙烷消毒

F1.1??環(huán)氧乙烷消毒效果評價用生物指示菌為枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC 9372）。在菌量為5*10⁵-5*10⁶cfu/片、環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L±30mg/L、作用溫度為54℃±2℃、相對濕度為60%±10%條件下，其殺滅90%微生物所需時間D值應(yīng)為2.5-5.8min，存活時間≥7.5min，殺滅時間≤58min。

F1.2??每次測試至少布放10片生物指示劑，放于最難殺滅處。消毒完畢，取出指示菌片接種鷹眼肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，將未處理陽性對照菌片作相同接種，兩者均置35℃±2℃培養(yǎng)。陽性對照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7天全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比滅活指數(shù)達到10³也可報告消毒合格。

F2??電離輻射消毒

F2.1??電離輻射消毒效果評價 用生物指示菌為短小桿菌芽胞E601（ATCC 27142），在菌量為5*10⁵-5*10⁶cfu/片時，其殺滅90%微生物所需劑量D₁₀值應(yīng)為1.7kGy。

F2.2??每次測試至少選5箱，每箱產(chǎn)品布放3片生物指示劑，置最小劑量處。消毒完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，將未處理陽性對照菌片作相同接種，兩者均置35℃±2℃培養(yǎng)。陽性對照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7天全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比滅活指數(shù)達到10³也可報告消毒合格。

F3??壓力蒸汽消毒

參照GB15981-1995的規(guī)定執(zhí)行。

附錄G

（標準的附錄）

培養(yǎng)基與實際制備

G1??營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

成分：

??蛋白胨??????????????????????????? 10g

??牛肉膏???????????????????????????? 3g

??氯化鈉???????????????????????????? 5g

??瓊脂????????????????????????????? 15g-20g

??蒸餾水??????????????????????????? 1000mL

制法：除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2-7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝試管，121℃滅菌15min后備用。

G2??乳糖膽鹽發(fā)酵管

成分：

??蛋白胨??????????????????????????? 20g

??豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）???????????? 5g

??乳糖????????????????????????????? 10g

????? 0.04%溴甲酚紫水溶液?????????????? 25mL

??蒸餾水??????????????????????? ????加至1000mL

制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加入指示劑，分裝沒管50mL，并放入一個小倒管，115℃滅菌15min，即得。

G3??乳糖發(fā)酵管

成分：

??蛋白胨??????????????????????????? 20g

??乳糖????????????????????????????? 10g

????? 0.04%溴甲酚紫水溶液?????????????? 25mL

??蒸餾水????????????????????????????加至1000mL

制法：將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加入指示劑，分裝每管10mL，并放入一個小倒管，115℃滅菌15min，即得。

G4??伊紅美藍瓊脂（EMB）

成分：

??蛋白胨??????????????????????????? 10g

??乳糖????????????????????????????? 10g

??????磷酸氫二鉀???????????????????????? 2g

??????瓊脂????????????????????????????? 17g

????? 2%伊紅Y溶液????????????????????? 20mL

0.65%美藍溶液??????????????????? ?10mL

??蒸餾水????????????????????????????加至1000mL

制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正pH至7.1，分裝與燒瓶內(nèi)，121℃滅菌15min備用，臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至55℃，加入伊紅和美藍溶液搖勻，傾注平板。

G5? SCDLP?液體培養(yǎng)基

成分：

?酪蛋白胨?????????????????????? ????17 g

?大豆蛋白胨????????????????????????? 3 g

?氯化鈉????????????????????????????? 5 g

?磷酸氫二鉀?????????????????????? ?2.5 g

?葡萄糖?????????????????????????? ?2.5 g

卵磷脂????????????????????????????? 1 g

?吐溫80????????????????????????????? 7 g

?蒸餾水?????????????????????????? ?1000 mL

制法：將各種成分混合(如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加熱溶解，調(diào)pH至7.2～7.3，分裝，121℃滅菌20min，搖勻，避免吐溫80沉于底部，冷至25℃后使用。

G6??十六烷三甲基溴化銨培養(yǎng)基

成分：

牛肉膏??????????????????????????????3 g

??蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??氯化鈉???????????????????????????? ?5 g

??十六烷三甲基溴銨???????????????? ?0.3 g

??瓊脂????????????????????????????? ?20 g

??蒸餾水????????????????????????? ?1000 mL

制法：除瓊脂外，上述各成分混合加熱溶解，調(diào)pH至7.4～7.6，然后加入瓊脂，115℃滅菌20 min，冷至55℃左右傾注平皿。

G7??綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面

成分：

??蛋白胨???????????????????????????? 20 g

??氯化鎂??????????????????????????? 1.4 g

??硫酸鉀???????????????????????????? 10 g

??瓊脂????????????????????????????? ?18 g

??甘油(化學(xué)純)?????????????????????? 10g

??蒸餾水??????????????????????????加至1 000 mL

制法：將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH至7.4，加入瓊脂和甘油，加熱溶解，分裝試管，115℃滅菌20 min，制成斜面?zhèn)溆谩8??明膠培養(yǎng)基

成分：

??牛肉膏????????????????????????????? 3 g

??蛋白胨????????????????????????????? 5 g

??明膠?????????????????????????????? 120 g

??蒸餾水??????????????????????????? ?1 000 mL

制法：各成分加入蒸餾水中浸泡20 min，加熱攪拌溶解，調(diào)pH至7.4，5 mL分裝試管中，115℃ 滅菌20 min，直立制成高層備用。

G9??硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基

成分：

??蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??酵母浸膏??????????????????????????? 3 g

??硝酸鉀????????????????????????????? 2 g

??亞硝酸鈉????????????????????????? 0.5 g

??蒸餾水??????????????????????????? 1000 mL

制法：將蛋白胨與酵母浸膏加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH至7.2，煮沸過濾后補足液量，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉溶解均勻，分裝到有小倒管的試管中，115℃滅菌20 min備用。

G10??血瓊脂培養(yǎng)基

成分：

營養(yǎng)瓊脂?????????????????????????? 100 mL

??脫纖維羊血(或兔血)????????????????? 10 mL

制法：將滅菌后的營養(yǎng)瓊脂加熱溶化，涼至55℃左右，用無菌方法將10 mL脫纖維血加入后搖勻，傾注平皿置冰箱備用。

G11??甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基

成分：

??蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??牛肉膏????????????????????????????? 5 g

??氯化鈉???????????????????????????? ?5 g

??甘露醇???????????????????????????? 10 g

?0.2％溴麝香草酚藍溶液????????????? 12 mL

蒸餾水??????????????????????????? 1000 mL

?制法：將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚藍混勻后，分裝試管，115℃滅菌20 min備用。

G12??葡萄糖肉湯

成分：

　蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??牛肉膏????????????????????????????? 5 g

??氯化鈉???????????????????????????? ?5 g

??葡萄糖???????????????????????????? 10 g

蒸餾水??????????????????????????? 1000 mL

制法：上述成分溶于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2～7.4，加熱溶解，分裝試管，121℃滅菌15min后備用。

G13??兔血漿

制法：取滅菌3.8％檸檬酸鈉1份，兔全血4份，混勻靜置，3 000 r/min離心5 min，取上清，棄血球。

G14??沙氏瓊脂培養(yǎng)基

??蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??葡萄糖???????????????????????????? 40g

??瓊脂?????????????????????????????? 20g

蒸餾水?????? ?????????????????????1000 mL

用700 mL蒸餾水將瓊脂溶解，300 mL蒸餾水將葡萄糖與蛋白胨溶解，混合上述兩部分，搖勻后分裝，115℃滅菌15 min，即得。使用前，用過濾除菌方法加入0.1g/L的氯霉素或者0.03g/L的鏈霉素。

定性試驗采用沙氏培養(yǎng)液，即除不加瓊脂外其他成分與制法同上。

G15??營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液

??蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??氯化鈉???????????????????????????? ?5 g

??牛肉膏????????????????????????????? 3 g

蒸餾水??????????????????????????? 1000 mL

調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2～7.4，分裝，115℃滅菌30 min，即得。

G16??溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基

??蛋白胨???????????????????????????? 10 g

??葡萄糖?????????????????????????????? 5g

蒸餾水??????????????????????????? 1000 mL

調(diào)節(jié)pH至7.0～7.2，加2％溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL，115℃ 滅菌30 min，即得。

G17??革蘭氏染色液

結(jié)晶紫染色液：

結(jié)晶紫????????????????????????????? 1 g

?95％乙醇????????????????????????? ?20 mL

??1％草酸銨水溶液??????????????????? 80 mL

將結(jié)晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。

革蘭氏碘液：

結(jié)晶紫????????????????????????????? 1 g

碘????????????????????????????????? 1 g

??碘化鉀????????????????????????????? 2 g

??蒸餾水???????????????????????????? 300 mL

脫色劑

95％乙醇

復(fù)染液：

(1)沙黃復(fù)染液：

沙黃?????????????????????????????? 0.25 g

??95％乙醇??????????????????????????? 10 mL

蒸餾水????????????????????????????? 90 mL

將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。

(2)稀石炭酸復(fù)紅液

稱取堿性復(fù)紅10g，研細，加95％乙醇100mL，放置過夜，濾紙過濾。取該液10mL，加5％石炭酸水溶液90mL混合，即為石炭酸復(fù)紅液。再取此液10mL，加水90mL，即為稀石炭酸復(fù)紅液。

G18 ?0.03 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）

成分：

磷酸氫二鈉?????????????????????? 2.83 g

??磷酸二氫鉀?????????????? ????????1.36 g

?蒸餾水?????????????????????????? 1000 mL

原文來源：http://www.gxshunjiang.com/