生物安全實驗室潔凈等級劃分標準

潔凈室（區(qū)）的檢測

本文闡述了潔凈室（區(qū)）的檢測。對潔凈室（區(qū)）級別參數(shù)塵粒最大允許數(shù)、微生物最大允數(shù)、換氣次數(shù)、照度、壓差、溫度和相對濕度進行了實際檢測方面的歸納和總結。

獸藥GMP是指獸藥生產質量管理規(guī)范，是獸藥生產、質量管理的制度和基本準則。獸藥GMP對于潔凈室（區(qū)）的空調凈化系統(tǒng)等硬件要求非常嚴格，潔凈級別劃分的規(guī)定亦十分明確。潔凈室（區(qū)）的潔凈級別主要用塵粒最大允許數(shù)、微生物最大允許數(shù)和換氣次數(shù)3個參數(shù)來劃分，同時對照度、壓差、溫度和相對濕度等參數(shù)也作出了具體的指導和規(guī)定。這些參數(shù)能對潔凈室（區(qū)）的級別作出相應合理的、科學的驗證和監(jiān)測。

下面主要闡述這些參數(shù)具體的檢測。

一、潔凈室（區(qū)）塵粒

塵粒是指一般尺寸為0.001μm～1000μm的固態(tài)和液態(tài)物質或兩者的混合物。塵粒檢測主要采用儀器光散射法，即空氣中的懸浮粒子在光的照射下產生光散射現(xiàn)象，散射光的強度與粒子的表面積成正比。檢測時，先確認空調凈化系統(tǒng)是否處于正常運行狀態(tài)，換氣次數(shù)或風速、壓差能否達到要求。然后按人流和物流的規(guī)定進入潔凈室（區(qū)）進行動態(tài)或靜態(tài)檢測，并測量潔凈室（區(qū)）的面積和容積，確定采樣點的數(shù)目、位置和采樣量。檢測要點見表1。

塵粒采樣時還需注意：1.在確認儀器計數(shù)穩(wěn)定后方可開始連續(xù)讀數(shù)。2.采樣管必須干凈，嚴禁滲漏。3.采樣管的長度應根據儀器的允許長度。除另有規(guī)定外，長度不得大于1.5m。4.計數(shù)器采樣口和儀器工作位置應處在同一氣壓和溫度下，以免產生測量誤差。5.須按照儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據的可靠性。6.對于單向流，儀器采樣口的朝向應正對氣流方向，對于非單向流，采樣口宜向上。7.布置采樣點時，應避開回風口。8.采樣時，測試人員應在采樣口下風側。

表1：?潔凈室（區(qū)）塵粒檢測要點

表2：潔凈室（區(qū)）塵粒檢測的最少采樣點數(shù)

表3??????????????潔凈室（區(qū)）塵粒檢測的最小采樣量

二、?潔凈室（區(qū)）微生物

潔凈室（區(qū)）微生物可檢測沉降菌或浮游菌。沉降菌檢測是通過自然沉降原理，收集空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿中，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。浮游菌的檢測是采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸浮在空氣中生物粒子于專門的培養(yǎng)基，經若干時間，在適宜的生長條件下其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

實際檢測浮游菌和沉降菌時，先確認潔凈室（區(qū)）的檢測條件能否達到級別要求。達到要求后，測試人員和檢測儀器等按潔凈室（區(qū)）的進出規(guī)定（如穿戴符合環(huán)境級別的工作服、紫外照射、儀器外體消毒等）進出潔凈室（區(qū)），測試人員先測量測試區(qū)域的面積和體積，確定采樣次數(shù)和采樣點。浮游菌確定采樣量后按儀器操作規(guī)程操作，把空氣中懸浮的微生物采集到肉湯瓊脂培養(yǎng)基上。沉降菌確定采樣時間后直接把培養(yǎng)基裸露在空氣中，讓空氣中的微生物自動降落在肉湯瓊脂培養(yǎng)基上。采樣要點見表4～7。采集完的培養(yǎng)基需在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間≥48h。同時選定不少于3只培養(yǎng)基作空白對照培養(yǎng)。

微生物檢測時需注意：

1.檢測前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，不能使用有變質、破損或污染的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿。

2.采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。

3.對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。

4.由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

5.若在本實驗室以外的環(huán)境中進行檢測，則培養(yǎng)基在整個運輸過程中必須對溫度進行控制，培養(yǎng)基需放在含有冰塊的、消毒過的運輸箱內，溫度控制在0℃～4℃，并在記錄中記錄運輸溫度。

表4??潔凈室（區(qū)）浮游菌的檢測要點

表5??潔凈室（區(qū)）浮游菌檢測的采樣點數(shù)目

表6??潔凈室（區(qū)）浮游菌檢測的最小采樣量

表7???潔凈室（區(qū)）沉降菌的檢測要點

表8???潔凈室（區(qū)）沉降菌檢測的最少采樣點數(shù)目

表9?????????潔凈室（區(qū)）沉降菌檢測的最少培養(yǎng)皿數(shù)

三、潔凈室（區(qū)）風速和換氣次數(shù)

風速和換氣次數(shù)檢測依據為JGJ71-90。風速、換氣次數(shù)必須首先進行檢測，潔凈室的各項效果必須是在設計的風速風量條件下獲得的。以風口截面平均風速乘以風口凈截面面積確定風量。潔凈室（區(qū)）換氣次數(shù)以送風量除以潔凈室（區(qū)）的體積來確定，從而判定潔凈室（區(qū)）是否符合級別規(guī)定，百級潔凈室（區(qū)）只需以最低風速進行判定。檢測要點見表10。檢測時，需注意檢測風速宜用檢測架固定風速儀以避免人體干擾，不得不手持風速儀檢測時，手臂應伸直至最長位置，使人體遠離測頭。

表10??潔凈室（區(qū)）風速、換氣次數(shù)的檢測要點

四、潔凈室（區(qū)）壓差、照度、噪聲、溫度和濕度

這些參數(shù)指標主要以JGJ71-90為檢測依據，以各檢測儀的原理進行檢測。檢測要點見表11～14。

檢測需注意:1.噪聲檢測時，檢測人員不得發(fā)出任何有礙于結果測定的聲音（如摩擦聲，說話聲等）。2.照度檢測時，儀器的采樣探頭不能有雜物污染，采樣時應在明亮處，不能在物體的陰影處采樣，且潔凈室（區(qū)）照度只測定除特殊局部照明之外的一般照明。

表11??潔凈室（區(qū)）靜壓差的檢測要點

表12???潔凈室（區(qū)）噪聲的檢測要點

表13???潔凈室（區(qū)）照度的檢測要點

表14???空氣溫度和相對濕度檢測要點

表15????空氣溫度和相對濕度檢測的采樣點次數(shù)

四、潔凈室（區(qū)）壓差、照度、噪聲、溫度和濕度

這些參數(shù)指標主要以JGJ71—90為檢測依據，以各檢測儀的原理進行檢測。檢測要點見表11~14。

檢測需注意：1.噪聲檢測時，檢驗人員不得發(fā)出任何又礙于結果測定的聲音（如摩擦聲，說話聲等）。2.照度檢測時，儀器的采樣探頭不能有雜物污染，采樣時應在照明亮處，不能在物體的陰影處采樣，且潔凈室（區(qū)）照度只測定除特殊局部照明之外的一般照明。

另附：萬級微生物潔凈室如何設計

一、???萬級微生物潔凈室設計說明設計技術指標：

A、微生物潔凈室設計說明技術指標說明：微生物潔凈室設計說明實驗區(qū)空氣調節(jié)系統(tǒng)由制冷量＊＊KW的組合式空調機組。微生物潔凈室設計說明潔凈度（萬級）≥0.5um　　≤350000粒/m3微生物潔凈室設計說明微生物浮游菌　萬級≤100/m3微生物潔凈室設計說明沉降菌　萬級≤3個/皿微生物潔凈室設計說明照明：實驗臺300LX，其它生產區(qū)域為150LX。微生物潔凈室設計說明室內相鄰房間相對靜壓差≥5pa，相對室外靜壓≥10pa。微生物潔凈室設計說明室內溫度18-26°C，室內相對濕度為45-60%。微生物潔凈室設計說明室內噪音≤60db(A)。微生物潔凈室設計說明電源：AC220V/380V-50HZ

B、微生物潔凈室設計說明排風口裝有高效過濾器，送風口裝有高效過濾靜壓箱，以實現(xiàn)進氣潔凈，另外更換高效過濾器比較方便。

C、一般室內送排風采用上送下排方式，室內排風口應設在室內被污染風險最高的區(qū)域，單側布置，不得有障礙。

D、回風口以余壓閥自動調節(jié)室內壓力，保持正壓潔凈狀態(tài)。

二、微生物潔凈室設計說明設計說明：

實驗室設計基本思路為經濟、實用。凈化要求級別為萬級。實驗室設計有一更、二更、風淋和緩沖等實驗前的準備工作。采用人流、物流分開原則，以減少實驗污染，保證安全。

A、本布置緊湊、合理，滿足了實驗室操作和空氣潔凈度等級要求，同時力求科學性與經濟性的原則，考慮實驗室要求和發(fā)展及運行費用最優(yōu)。

B、潔凈室入口處設置風淋室，能有效清除人體所帶灰塵，減少潔凈室的灰塵量，同時風淋室也起到了氣閘的作用，防止不潔凈空氣由門進入潔凈區(qū)。

C、潔凈室需向室內供給一定比例的新鮮空氣，凈化過濾后進入各實驗室以補償排風，保證正壓及工作人員需要。

D、風量回風次數(shù)采用風量調節(jié)閥對不同要求潔凈級別的區(qū)域進行控制，以及壓強梯度的調節(jié)，保證氣流同“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域，潔凈室不同級別之間壓差為≥5pa，潔凈室與室外壓差為≥10pa。

E、潔凈室設紫處燈殺菌裝置。

F、傳遞窗為全不銹鋼材質，機械聯(lián)鎖控制，內帶滅菌裝置。

G、觀察窗為密閉潔凈窗，門為氣密潔凈門。生物潔凈室設計和施工中的問題摘要：本文介紹了幾種不同類型生物潔凈室的不同特點和設計方法，并針對在生物潔凈室設計施工中出現(xiàn)的幾個問題提出自己的看法和意見。

生物潔凈室的應用越來越廣泛，目前集中在醫(yī)院手術室和病房、制藥廠、生物安全實驗室、動物房等。同樣級別的潔凈室，由于應用領域不同，要求也有很大區(qū)別，筆者檢測的若干生物潔凈室中，出現(xiàn)了各種不同問題，很多是由于對各種生物潔凈室的特點和要求缺乏了解造成的。首先，不同類型的生物潔凈室必須遵循相應的規(guī)范要求，不了解這些規(guī)范，是無法進行設計施工的。目前針對不同類型生物潔凈室的一些規(guī)范如表1所列。只有熟悉各行業(yè)的特點，充分掌握各規(guī)范的要求，才能切實做好生物潔凈室的設計、施工、調試等工作。

表2中將各參數(shù)作了詳細的比較。

應當指出，表2中的參數(shù)要求并不詳盡，應以原規(guī)范為準1應用于各種生物潔凈室的規(guī)范編號名稱簡稱適用范圍GB 50073-2001潔凈廠房設計規(guī)范設計規(guī)范一切潔凈室，尤其是電子廠房Code for design of clean room GB 50333-2002醫(yī)院潔凈手術部建筑技術規(guī)范手術部規(guī)范醫(yī)院潔凈手術部Architectural technical code for hospital cleanoperating department YFB 004-1997軍隊醫(yī)院潔凈護理單元建筑技術規(guī)范護理病房規(guī)范醫(yī)院血液病房等Architectural Standard on Bioclean Nursing UnitFor Military Hospital 1998藥品生產質量管理規(guī)范人藥GMP人用藥品的生產Good manufacture practice for drug 2002獸藥生產質量管理規(guī)范獸藥GMP獸用藥品的生產Good manufacture practice for veterinary drug YY 0033-2000無菌醫(yī)療器具生產管理規(guī)范醫(yī)療器具GMP無菌醫(yī)療器具的生產Good manufacture practice for sterile medicaldevices GB xxxx-200x生物安全實驗室建筑技術規(guī)范生物安全實驗室規(guī)范生物安全實驗室的建設Architectural and Technical Code for BiosafetyLaboratories GB 14925-2001實驗動物環(huán)境與設施動物房規(guī)范各種實驗動物繁育、實驗設施的建設Laboratory animal—Requirements of environment andhousing facilities表2各參數(shù)在不同規(guī)范中的不同要求參數(shù)級別設計規(guī)范手術部規(guī)范護理病房規(guī)范生物實驗室規(guī)范截面風速(m/s) 5（百）0.2~0.5 0.25~0.30 0.18~0.25 — 6（千）50~60 — — — 7（萬）15~25 30~36＞25 ≥12~15 8（10萬）10~15 18~22＞15（30萬）12~15 — —靜壓差(Pa)不同級別之間≥5 ≤30＞5 —潔凈區(qū)對非潔凈區(qū)≥5 ≥10 — —潔凈區(qū)對室外≥10 ≥15＞15 —相對負壓— — — -10~-15噪聲dB(A)非單向流潔凈室≤60 ≤52 ≤50 ≤60單向流潔凈室≤65 ≤50 45~50照度(lx)主要工作區(qū)750~2500 ≥350 — ≥200一般區(qū)100~500 ≥150~200 — ≥150溫度(℃)工作區(qū)冬季20~22 22~25 22~24 18~27夏季24~26 24~26輔助區(qū)冬季16~20 21~27 20~26 20~26夏季26~30 25~29相對濕度(%)工作區(qū)冬季30~50 35(40)~60 45~60 30~70夏季50~70輔助區(qū)— ≤60＜65 —表2（完）參數(shù)級別藥監(jiān)局GMP獸藥GMP醫(yī)療器具GMP動物房規(guī)范截面風速(m/s) 5（百）— ≥0.25 ≥0.30 —換氣次數(shù)(h-1) 5（百）— — 20~50 6（千）— — — 7（萬）≥20 ≥20 10~20 8（10萬）≥15 ≥15 —（30萬）≥10 ≥12靜壓差(Pa)不同級別之間≥5 ≥5 ≥5 20~50潔凈區(qū)對非潔凈區(qū)— ≥10 ≥5潔凈區(qū)對室外≥10 ≥12 ≥10噪聲dB(A)非單向流潔凈室— ≤60 — ≤60單向流潔凈室— ≤65局百房間— ≤63 —照度(lx)主要工作區(qū)300 ≥150 150~300一般區(qū)— ≥100溫度(℃) 18~26 18~26 18~28 20~26相對濕度(%) 45~65 30~65 45~65 40~70了解了不同生物潔凈室的不同要求，下面談談在生物潔凈室設計施工中遇到的幾個問題。

首先是平面布置方面的問題。這個問題在藥廠潔凈廠房和生物安全實驗室的平面設計中尤為突出，主要的問題就是平面過于復雜。的確，在藥廠平面設計中，應盡量保證潔凈區(qū)不受污染，做到合理分區(qū)，潔污分開，人流、物流明顯，但一定要避免矯枉過正。由于一些行業(yè)主管部門在制訂驗收標準時，缺乏專業(yè)知識，對潔凈室的原理和特點了解不夠，往往將潔凈室過于神秘化，復雜化，因此對潔凈室平面布局過于苛刻，造成很多不必要的麻煩。這個問題在緩沖室的設置上尤為突出。例如某藥廠人員進入潔凈廠房的過程是這樣的：換鞋一更緩沖二更洗手消毒緩沖潔凈走廊三更緩沖或手消毒高級別潔凈室，由此，工作人員在進入高級別潔凈室工作前，需要進出9個房間，開啟關閉18扇門，其復雜程度可想而知。

另外，很多藥廠由于規(guī)模小投資少，廠房十分緊湊，以至于每間輔助間的面積只有幾平方米，甚至只有2平方米，于是工作人員在幾乎不能同時容下2人的房間里，不停的開門、轉身、關門，以至于近乎暈頭轉向。要求嚴格是好事，但如果矯枉過正就會適得其反，很多工人為了進出方便，往往很多門都不關，很多房間形同虛設。將可以合并的房間合并，將沒有必要設置的房間取消，是解決這一問題的辦法。例如洗手消毒完全可以當作緩沖間，另外對于低級別潔凈室之間，如萬級和10萬級潔凈室之間，不一定非要設置緩沖室，有些場合，三更的設置也是可以考慮的。緩沖間的設置主要是通過進出兩門的不同時開啟起到氣閘的隔離作用，如果嚴格管理，一些輔助房間如二更等，完全可以起到緩沖作用。

另外，在10萬級和萬級房間也沒有一定設置緩沖的必要。10萬級房間和萬級房間內的空氣含塵濃度不象一些非專業(yè)人士想象的那樣相差10倍，門一開啟就會污染。事實上，兩者相差不多，例如獸藥GMP(2002)中規(guī)定，10萬級房間最低換氣次數(shù)是15次/h，萬級房間最低換氣次數(shù)是20次/h，相差不多，另外由于房間體積普遍較小，例如對于4m2的房間，5次/h的換氣次數(shù)僅有50m3/h左右的送風量，而這50m3/h的送風量是較難調整的，另外，無論設計施工都要適當留有一定余量，所以，從筆者檢測的若干藥廠來看，在人員進出路線上的一些小房間，除了名義上的潔凈度級別不同外，其換氣次數(shù)和空氣含塵濃度沒有什么區(qū)別。有時所謂的10萬級房間的含塵濃度比萬級房間還要低。以上的觀點是想證明不能以主觀意識制訂驗收標準，應該充分以實際出發(fā)考慮問題。精簡平面并不影響實際功能，而且可以使人員進出方便簡單，節(jié)省工程造價，擴大有效使用面積，何樂而不為。同樣的問題還出現(xiàn)在三級生物安全實驗室的建設中，行業(yè)主管部門除了要求加設很多緩沖外，還要求做到人流、物流、潔物、污物各走不同路線，完全分開，但事實上是不可能做到的，也沒有必要。

一些政策制訂人為強調重視程度或迎合一些需要，提出的“生物安全怎么強調都不過份”的說法是不負責任的，對于工程技術人員來講必須一切從實際出發(fā)，凡事都要有度。只要能完全滿足安全需要即可，層層加碼是專業(yè)知識不足，缺乏自信心的表現(xiàn)。筆者認為，自SARS以來提出的P3實驗室設“三區(qū)兩緩”（即實驗室分為清潔區(qū)，半污染區(qū)和污染區(qū)，不同區(qū)域之間必須設緩沖）的要求有待商榷，從國外的一些資料也可以看到，一些發(fā)達國家的生物安全實驗室平面比我們簡單的多，一些危險度不高的實驗室設置“兩區(qū)一緩”就足夠了。制訂“三區(qū)兩緩”的人可能設計工作接觸不多，事實上，由于生物安全實驗室對壓差要求極為嚴格，“三區(qū)兩緩”往往要6、7層房間，層層負壓，而且要嚴格保證，無論從設計、施工以及自控上，都是極難保證的。所以還是要從實際出發(fā)，讓生物安全實驗室真正做到安全、實用、經濟、可行。

在生物潔凈室施工中有一個突出的問題就是圓弧角的使用。生物潔凈室主要以控制細菌等微生物為根本目的，而微生物極易在一些角落里滋生，因此生物潔凈室應易于清掃，盡量減少死角，因此在JGJ 71-90《潔凈室施工及驗收規(guī)范中》的第2.3.8條規(guī)定：踢腳板部分施工時應與墻面齊平或略縮進2~3mm。當踢腳板與地面材料相同時可做成小圓角，其圓角半徑R應大于等于50mm；當踢腳板與地面材料不同時，應用彈性材料嵌固。除地面與墻面的交角要求可設圓角外，對其他部位并未做規(guī)定?，F(xiàn)在普遍的做法是將所有交角均加裝鋁合金圓角，由于制作粗糙，使得很多工程的圓角流于形式，甚至作用適得其反。對于墻壁之間，墻壁與頂棚之間的圓角，本來作用不是很大，現(xiàn)在成了施工單位掩蓋粗糙接角的“遮羞布”。

對于墻面與地面的交角，其實是十分關鍵的，但往往成為藏污納垢，滋生細菌的場所。原因在于：由于圓弧角有厚度，在圓角與板壁和地面的兩個交角處，便會形成兩個細小的接縫，由于地面、板壁不平，在接縫處往往有很多縫隙，很多施工單位偷工減料，沒有打膠密封，有的即使打膠了，也會有開裂的現(xiàn)象。因此本來的目的是為了消除衛(wèi)生死角，而實際情況卻增加了很多隱患。這種情況在平時不明顯，在潔凈室進行衛(wèi)生清掃時就會暴露無遺，地面上一旦有水，水會通過縫隙滲到隔壁房間，圓角下經常滿是水漬，成為細菌滋生的絕好場地。造成這種情況的根本原因是對規(guī)范的規(guī)定沒有真正領會，只是流于形式。對于我國的生物潔凈室建設，我們已不能僅僅滿足于那種解決“有與沒有”的層面，必須提高層次，做到真正實用，而不是應付認證工作，不僅要建，而且一定要建好。

有幾種做法值得推薦：

1.安裝圓角之后，鋪設一定厚度的自流坪地面，徹底消除地面接縫；

2.安裝圓角之后，鋪裝整體卷材地面，然后將卷材沿圓角上鋪至壁板，使圓角和地面成為一體。

3.采用建筑材料（如膠砂）砌筑圓弧狀的壁板基座，基座與地面做同樣的處理，如刷涂料等，使地面和基座成為一體，而且基座作為踢腳部分與墻面齊平或低于墻面。生物潔凈室的特點還很多，實際工程中的問題也很多，我們只有充分了解不同類別潔凈室的不同要求和特點，熟悉規(guī)范的規(guī)定，才能真正把生物潔凈室建設好。