ISO14698-1?生物潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境
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目錄?
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第一部分：臨時(shí)標(biāo)題：生物污染控制——總則??? ?????P1
附件A（標(biāo)準(zhǔn)）生物污染測(cè)量方法的原則???????????????????? P11
附錄B（參考）氣懸浮生物污染測(cè)量方法指導(dǎo)???????????????? P12
附件C（參考）空氣采樣器效率的評(píng)估與鑒定指導(dǎo)???????????? P15
附件D（參考）表面生物污染的測(cè)量方法指導(dǎo)???????????????? P19
附件E（參考）織品生物污染的測(cè)量方法指導(dǎo)????? ???????????P20
附件F（參考）洗衣驗(yàn)證方法指導(dǎo)?????????????????????????? P22
附件G（參考）液體生物污染的測(cè)量方法指導(dǎo)???????????????? P25
附件H（參考）培訓(xùn)指導(dǎo)?????????????????????????????????? P26
第二部分：臨時(shí)標(biāo)題：生物污染控制——生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)與說(shuō)明????? P32
第三部分；臨時(shí)標(biāo)題：生物污染控制——載有生物污染濕污物或生物膜的惰性表面的清潔與（或）消毒效率的測(cè)量方法??????????????????????????????P41
潔凈室” alt=”生物潔凈室” />
前言
ISO（國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織）是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)機(jī)關(guān)（ISO成員機(jī)關(guān)）的全球性聯(lián)合會(huì)。世界標(biāo)準(zhǔn)的編寫工作通常由ISO技術(shù)委員會(huì)來(lái)完成。每個(gè)成員機(jī)關(guān)如果對(duì)專設(shè)技術(shù)委員會(huì)的某個(gè)主題感興趣，就有權(quán)向該委員會(huì)派出代表。凡與ISO有聯(lián)系的政府和非政府的國(guó)際組織也可參加這項(xiàng)工作。有關(guān)電工標(biāo)準(zhǔn)化的各項(xiàng)事宜，ISO正與國(guó)際電工委員會(huì)進(jìn)行密切合作。
被技術(shù)委員會(huì)采用的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)草本要發(fā)到成員機(jī)關(guān)進(jìn)行投票，是否作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)出版要有75%以上的成員機(jī)關(guān)投票同意。
國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)14698-1由潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境技術(shù)委員會(huì)ISO/TIC 209編寫。
ISO14698的大標(biāo)題為：潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境，其構(gòu)成有以上內(nèi)容：
第一部分：臨時(shí)標(biāo)題：生物污染控制——總則
第二部分：臨時(shí)標(biāo)題：生物污染控制——生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)與說(shuō)明
第三部分；臨時(shí)標(biāo)題：生物污染控制——載有生物污染濕污物或生物膜的惰性表面的清潔與（或）消毒效率的測(cè)量方法
用戶應(yīng)當(dāng)注意，第一至第三部分的標(biāo)題是第一部分發(fā)放時(shí)的工作標(biāo)題，如果從工作計(jì)劃中刪去一個(gè)以上這樣的標(biāo)題，剩余部分可重新編號(hào)。
附件A是標(biāo)準(zhǔn)性文件，是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的組成部分。附件B到G為參考性文件，提供較為詳細(xì)的信息。
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序言
本文描述的原理用于推行適宜的衛(wèi)生做法。只要有規(guī)定要求，可使用標(biāo)準(zhǔn)所附附件中建議的方法，但是建議的方法要與具體規(guī)定的方法相當(dāng)。
１ 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)描述了潔凈技術(shù)使用時(shí)評(píng)估與控制生物污染的正式系統(tǒng)的原則和基本方法，使危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)的生物污染得以被反復(fù)監(jiān)控以及選擇適當(dāng)?shù)目刂品椒āＴ谖ｋU(xiǎn)性小或可忽略不計(jì)的區(qū)域，本標(biāo)準(zhǔn)可作為參考。
２ 參考標(biāo)準(zhǔn)
以下標(biāo)準(zhǔn)含有通過(guò)本文文字的參比形成本標(biāo)準(zhǔn)條款的內(nèi)容。出版的時(shí)候，當(dāng)時(shí)提到的各版本是有效的。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)有修改，希望以本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)的締約方了解是否可以采用以下最新版本的標(biāo)準(zhǔn)。IEC和ISO成員要對(duì)當(dāng)前有效的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)做好記錄。
ISO8402：質(zhì)量管理與質(zhì)量保證-詞匯
3?????????定義
為進(jìn)一步明確本標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語(yǔ)在潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境系列文件中的標(biāo)準(zhǔn)定義增加了額外的說(shuō)明文字（如：微生物的，生物污染，有生命的）。以下定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)：
3．1
3．1．1
行動(dòng)限量（action level）
規(guī)定了用戶根據(jù)控制環(huán)境廟宇的微生物限量。
注：當(dāng)超過(guò)行動(dòng)限量時(shí)，需立即采取行動(dòng)并了解后續(xù)的糾正措施。
3．1．2
空氣生物污染（aerobiocontamination）
空氣和/或氣體受到活粒子的污染。
3．1．3
報(bào)警限量（alert level）
規(guī)定了用戶為控制環(huán)境廟宇的微生物限量，發(fā)出可能偏離正常條件的早期警告。
注：超過(guò)報(bào)警限量時(shí)，應(yīng)進(jìn)行調(diào)查以確保過(guò)程和/或環(huán)境得到控制。
3．1．4
生物氣溶膠（bioaerosol）
在氣體環(huán)境中彌散的生物介質(zhì)（如：活粒子，過(guò)敏素，毒素或微生物原）
3．1．5
生物污染（biocontamination）
材料、器件、個(gè)體、表面、液體、氣體或空氣受活粒子的污染。
3．1．6
潔凈室（cleanroom）
空氣懸浮粒子濃度數(shù)量要受到控制的房間，其建造和使用方式是為了減少粒子帶入房間和在房間內(nèi)產(chǎn)生和滯留，并且必要時(shí)其它相關(guān)參數(shù)（如：溫度，濕度和壓力）要得到控制。
3．1．7
接觸裝置（contact device）
專用容器，用于裝放滅菌后的培養(yǎng)基，帶有可維護(hù)表面。
3．1．8
接觸盤（control plate）
接觸裝置，其容器是一個(gè)硬盤。
3．1．9
控制點(diǎn)（control point）
控制環(huán)境內(nèi)實(shí)施控制的任意點(diǎn)，在該點(diǎn)上可防止、消除生物污染危險(xiǎn)或?qū)⑽ｋU(xiǎn)減至合格的標(biāo)準(zhǔn)。
3．1．10
控制環(huán)境（controlled environment）
采用指定手段對(duì)污染源實(shí)施控制的規(guī)定區(qū)域。
3．1．11
改正措施（corrective action）
生物污染監(jiān)控結(jié)果表明已超出報(bào)警或行動(dòng)限量時(shí)要采取的措施。
3．1．12
危害（hazard）
對(duì)個(gè)人、環(huán)境、工藝或產(chǎn)品產(chǎn)生不利影響的生物、化學(xué)或物理成分或因素。
3．1．13
碰撞（impact）
活粒子與固體表面的碰撞。
3．1．14
沖擊（impingement）
見(jiàn)液體分離。
3．1．15
液體分離：沖擊（liquid trapping: impingement）
活粒子與液面碰撞，液體隨后進(jìn)入。
3．1．16
鑒定（qualification）
展示實(shí)體是否能滿足指定要求（實(shí)體：活動(dòng)、或工藝、產(chǎn)品、組織或其組合）的過(guò)程（ISO 8402）
3．1．17
危險(xiǎn)（risk）
有關(guān)危害的已知有害結(jié)果發(fā)生的可能性。
3．1．18
沉降盤（settle plate）
指敞開(kāi)一段時(shí)間的合適的容器（如：裝載適量滅菌培養(yǎng)基的、大小適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿）。
3．1．19
拭子（swab）
經(jīng)過(guò)滅菌的采集裝置，對(duì)正在采樣的微生物的生長(zhǎng)無(wú)毒性、無(wú)抑制性，由適當(dāng)尺寸的特定材料構(gòu)成，裝在固定裝置上。
3．1．20
涂拭（swabbing）
用拭子對(duì)指定表面涂拭進(jìn)行采樣，拭子要用適當(dāng)?shù)妮腿∫海ㄏ疵撘海╊A(yù)先浸濕，以探測(cè)活粒子。
3．1．21
目標(biāo)限量（target level）
由用戶自定的指定微生物限量。
3．1．22
驗(yàn)證（validation）
檢查和提供客觀證明，表明特定用途的特殊要求得到滿足，以此實(shí)現(xiàn)確認(rèn)（ISO 8402）
3．1．23
確認(rèn)（verification）
定期檢查正式系統(tǒng)是否按要求工作。
注：可采用監(jiān)測(cè)和審查方法、規(guī)程與試驗(yàn)的方式，包括隨機(jī)采樣與分析，以確定正式系統(tǒng)是否正確地工作。
3．1．24
活粒子（viable particle）
能夠繁殖產(chǎn)生可觀察到生長(zhǎng)的、孤立的、自然發(fā)生的或累積的微生物。
3．1．25
活單位（viable unit）（VU）
一個(gè)以上集結(jié)的活粒子可算為一個(gè)單位。當(dāng)瓊脂培養(yǎng)基生成一些被稱為菌落的VU時(shí)，通常將它們稱為菌落形成單位。
3．1．26
危險(xiǎn)區(qū)（zone at risk）
個(gè)人、產(chǎn)品或材料（或以上內(nèi)容的任意組合）極易受微生物污染的地理定義與界定的空間。
3．2??使用狀態(tài)
3．2．1
空態(tài)（as-built）
此狀態(tài)為安裝已達(dá)到完成了各動(dòng)力管線的連接并能發(fā)揮作用、但無(wú)生產(chǎn)設(shè)備、材料或人員。
3．2．2
靜態(tài)（at-rest）
此狀態(tài)為設(shè)備已安裝并能按用戶與供應(yīng)商之間達(dá)成的協(xié)議運(yùn)行，但無(wú)人員進(jìn)入。
3．2．3
動(dòng)態(tài)（operational）
此狀態(tài)為安裝已按指定方式發(fā)揮作用，指定數(shù)量的人員已經(jīng)進(jìn)入并以約定的方式工作。
4??生物污染的控制原則
建立、使用和維護(hù)正式系統(tǒng)，以便在潔凈室和相關(guān)控制環(huán)境下評(píng)估和控制潔凈室和相關(guān)控制環(huán)境下的各因素，并影響工藝和產(chǎn)品的微生物質(zhì)量。
實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)有一些公認(rèn)的辦法，比如危險(xiǎn)評(píng)估[1：2]，如危害分析臨界控制點(diǎn)（HACCP）系統(tǒng)[3：4]，故障樹(shù)分析（FTA）[5]，或故障方式與效果分析（FMEA）[6]。也可使用其它經(jīng)確認(rèn)的同等系統(tǒng)[7]。
注：根據(jù)HACCP原則修改的系統(tǒng)舉例以作參考[8]。
在這樣的系統(tǒng)內(nèi)部，可對(duì)具體危害及其控制的預(yù)防措施進(jìn)行分析、確定和文件編制。本標(biāo)準(zhǔn)只論述了微生物的危害。
為了評(píng)估和控制微生物的危害，選定的系統(tǒng)至少要涉及以下原則：
a)??發(fā)現(xiàn)與工藝、產(chǎn)品或個(gè)人相關(guān)的可能危害。評(píng)估發(fā)生危害的可能性，找到對(duì)其控制的預(yù)防措施。
b)??指定危險(xiǎn)區(qū)，在每個(gè)區(qū)內(nèi)，確定可被控制的點(diǎn)/過(guò)程/操作步驟/環(huán)境條件，以消除危害或減少其發(fā)生的可能性。
c)??規(guī)定不允許超出的限量，以保證控制。
d)??規(guī)定有計(jì)劃進(jìn)行試驗(yàn)或觀察，以監(jiān)視控制系統(tǒng)。
e)??規(guī)定當(dāng)監(jiān)控表明在某個(gè)點(diǎn)/過(guò)程/操作步驟/環(huán)境條件失控時(shí)要采取的改正措施。
f)??建立確認(rèn)系統(tǒng)正常工作的規(guī)程。
g)??建立并保存適當(dāng)?shù)奈募?/p>
5一般要求
用戶有責(zé)任開(kāi)發(fā)、啟用、實(shí)施生物污染控制的監(jiān)控系統(tǒng)并對(duì)其進(jìn)行文件編寫，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)不利條件。這樣的計(jì)劃必須符合應(yīng)用現(xiàn)場(chǎng)、具體設(shè)施和指定條件，該系統(tǒng)必須是質(zhì)量管理系統(tǒng)的組成部分。這要包括對(duì)選定的正式系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)（有關(guān)生物污染的具體建議，請(qǐng)看附件H）。
此外，生物污染控制計(jì)劃的設(shè)計(jì)與實(shí)施要做到減少采樣本身造成產(chǎn)品和/或危險(xiǎn)區(qū)污染的可能性。
危險(xiǎn)區(qū)的分類應(yīng)按相關(guān)的原則或規(guī)定實(shí)施。按生物污染程度進(jìn)行的危險(xiǎn)區(qū)分類可按以下情況評(píng)估：
–??低等危險(xiǎn)或可忽略危險(xiǎn)；
–??中等危險(xiǎn)；
–??高危險(xiǎn)；
–??最高危險(xiǎn)。
本標(biāo)準(zhǔn)不意味也不接受空氣懸浮細(xì)菌和粒子污染等級(jí)之間的直接恒定或因果聯(lián)系。如果兩個(gè)參數(shù)的目標(biāo)等級(jí)是指定或強(qiáng)制的，可能需要單獨(dú)控制。
5．1??生物污染的分析與測(cè)量
生物污染可構(gòu)成危害的方面有表面、空氣、液體、織物等（見(jiàn)附件B，D，E，F(xiàn)）。
危險(xiǎn)區(qū)如果采用了潔凈技術(shù)，其探測(cè)與監(jiān)控要按采樣計(jì)劃采用適當(dāng)方法通過(guò)采樣和計(jì)數(shù)活單位來(lái)實(shí)施。
當(dāng)設(shè)施為空態(tài)、靜態(tài)或隨時(shí)可用狀態(tài)時(shí)，要進(jìn)行危險(xiǎn)區(qū)的監(jiān)控。在動(dòng)態(tài)時(shí)也要按選定的正式系統(tǒng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)控。（見(jiàn)4）
5．2??采樣
以下為采樣的一般原則，詳情見(jiàn)附件A。
5．2．1??采樣計(jì)劃
采樣計(jì)劃通過(guò)選定的正式系統(tǒng)編寫，并作為文件式的程序格式化。這對(duì)于準(zhǔn)確評(píng)估和解釋生物污染數(shù)據(jù)是必要的。
區(qū)域處于動(dòng)態(tài)時(shí)要進(jìn)行采樣，采樣時(shí)間在系統(tǒng)的壓力最大時(shí)（即：一班就要結(jié)束或活動(dòng)量最大時(shí)）。
在靜態(tài)或隨時(shí)可用狀態(tài)時(shí)采樣也可有關(guān)于設(shè)施言教性能方面的有用信息。
采樣計(jì)劃應(yīng)包括以下內(nèi)容：
a)??為在選定的正式系統(tǒng)的框架內(nèi)提供參考的初期采樣計(jì)劃
b)??由于實(shí)施選定的正式系統(tǒng)產(chǎn)生的常規(guī)采樣計(jì)劃
5．2．2??采樣計(jì)劃的設(shè)計(jì)
為了保護(hù)個(gè)人、環(huán)境、工藝和產(chǎn)品，采樣計(jì)劃要考慮危險(xiǎn)區(qū)的潔凈度和正在進(jìn)行活動(dòng)要求的生物污染控制程度?，F(xiàn)就要考慮的內(nèi)容舉例：
a)??現(xiàn)場(chǎng)選擇，功能和地理方面；
b)??采樣數(shù)量；
注：有限或很少的采樣量可能不足以提供有代表性數(shù)據(jù)，但有時(shí)增加采樣次數(shù)可以彌補(bǔ)不足。
c)??采樣次數(shù)；
d)??采樣方法，包括試樣是質(zhì)量上的還是數(shù)量上的；
e)??采樣量/面積；
f)??稀釋劑，沖洗液，中和劑等；
g)??與影響培養(yǎng)結(jié)果特殊情況有關(guān)的因素；
h)??危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)操作、人員和設(shè)備的影響，它們構(gòu)成的生物污染如：
1）??壓縮氣體；
2）??房間空氣；
3）??制造設(shè)備；
4）??監(jiān)控測(cè)量裝置；
5）??存儲(chǔ)容器；
6）??區(qū)內(nèi)人員數(shù)；
7）??人員的未保護(hù)表面；
8）??個(gè)人打扮；
9）??防護(hù)服
10）墻壁/吊頂
11）地面
12）門
13）工作臺(tái)
14）椅子
15）從其它來(lái)源進(jìn)入的空氣
5．2．3??采樣次數(shù)
采樣次數(shù)應(yīng)通過(guò)選定的正式系統(tǒng)（見(jiàn)4）制定，并且必要時(shí)遇到以下情況要經(jīng)過(guò)確認(rèn)和/或修改：
a)??結(jié)果超過(guò)報(bào)警限量或行動(dòng)限量
b)??延長(zhǎng)了活動(dòng)的停頓時(shí)間
c)??在危險(xiǎn)區(qū)發(fā)現(xiàn)了感染劑
d)??在工作期內(nèi)對(duì)通風(fēng)系統(tǒng)進(jìn)行重大維護(hù)
e)??工藝變化影響到環(huán)境
f)??記錄到非常規(guī)結(jié)果
g)??清洗或消毒程序有變化
h)??非計(jì)劃事件引起生物污染
5．2．4??采樣點(diǎn)
采樣點(diǎn)的確定要通過(guò)選定的正式系統(tǒng)，并要反映在采樣計(jì)劃內(nèi)。
注：每個(gè)點(diǎn)的可能采樣在一次以上，在不同位置采樣次數(shù)可能不同。
在書(shū)面規(guī)程確定的點(diǎn)進(jìn)行采樣。
5．2．5??采樣區(qū)分
每個(gè)采樣的標(biāo)簽要有以下信息或可進(jìn)行信息追溯的編碼：
a)??采集點(diǎn)
b)??采集日期與時(shí)間
c)??采樣人員
d)??采樣時(shí)進(jìn)行的活動(dòng)
e)??采樣區(qū)分及（如果合適）培養(yǎng)基類型
f)??與采樣計(jì)劃不同之處
5．2．6????????????方法
要選擇和采用適當(dāng)?shù)牟蓸臃椒ê陀嘘P(guān)孝順，以反映情況的復(fù)雜性和變化。采樣選用的設(shè)備和方法要符合書(shū)面規(guī)程和設(shè)備廠家提供的要求。
5．3??采樣的處理
樣品的采集、運(yùn)輸和處理不應(yīng)影響被采集細(xì)菌的活性和數(shù)量。要考慮的因素：
a)??運(yùn)輸/存放條件和時(shí)間
b)??中和劑的使用
c)??滲透溶質(zhì)的使用
5．4??樣品的培養(yǎng)
要根據(jù)預(yù)期的微生物種類及采樣的環(huán)境以及視使用的規(guī)程和設(shè)備情況選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和/或培養(yǎng)條件（如：溫度、時(shí)間長(zhǎng)度、氧張力，相對(duì)濕度）。
5．4．1??培養(yǎng)基
細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)基應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)型，如無(wú)另外要求，則為非選擇型。培養(yǎng)基要有適當(dāng)?shù)奶砑觿员惝?dāng)采樣點(diǎn)有殘留的抗菌活動(dòng)時(shí)（如：清洗/消毒程序后或它們?cè)谏鲜隹刂骗h(huán)境下經(jīng)過(guò)處理所帶的抗菌素）可以克服或減少影響。
如果在潔凈室或相關(guān)環(huán)境中使用培養(yǎng)基，培養(yǎng)基容器的外表面應(yīng)保有與其用途相適應(yīng)的潔凈度。
注：根據(jù)使用現(xiàn)場(chǎng)的情況，可能需要雙層或三層外包。
要保證對(duì)使用的培養(yǎng)基采用適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制規(guī)程。
5．4．2??培養(yǎng)
根據(jù)采樣的環(huán)境條件、培養(yǎng)基特性和微生物方法的確認(rèn)情況，應(yīng)為預(yù)期的微生物選擇接種培養(yǎng)基的適當(dāng)培養(yǎng)溫度和時(shí)間。
注1：如果涉及到厭氧、耐熱、微氧性、營(yíng)養(yǎng)缺乏或需要復(fù)雜營(yíng)養(yǎng)的細(xì)菌和真菌，可能需要特定的大氣條件和/或延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。一般公認(rèn)的培養(yǎng)總時(shí)間是，細(xì)菌5天，真菌7天，特別是在VU數(shù)很低時(shí)。從第一天開(kāi)始就應(yīng)觀察培養(yǎng)皿。
注2：經(jīng)過(guò)適當(dāng)培養(yǎng)條件下的初步培養(yǎng)，對(duì)于中溫細(xì)菌，并根據(jù)采樣環(huán)境，在室溫和日光條件下延長(zhǎng)3天的培養(yǎng)期可能是明智的。已經(jīng)得到證明，這樣做可以使曾經(jīng)暴露于空氣和表面的受力細(xì)菌復(fù)活，以獲得再次形成菌落的條件。
5．5??評(píng)價(jià)
生物污染的評(píng)價(jià)應(yīng)有有效改正措施的足夠信息。有關(guān)生物污染數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)的詳細(xì)資料見(jiàn)ISO 14698-2。
注：評(píng)價(jià)整體生物污染是對(duì)危險(xiǎn)區(qū)的重要控制功能?？捎帽O(jiān)控間接指標(biāo)來(lái)監(jiān)控微生物污染。但是，應(yīng)當(dāng)注意到，這樣的指標(biāo)與生物污染之間可能沒(méi)有直接的關(guān)系，因此，仍然要靠驗(yàn)證和確認(rèn)來(lái)對(duì)生物污染進(jìn)行直接的預(yù)測(cè)。
5．5．1??計(jì)數(shù)
控制環(huán)境的細(xì)菌監(jiān)控可包括空氣、流體、表面、織物和設(shè)備細(xì)菌污染的鑒定，以便在短時(shí)間內(nèi)及時(shí)獲得到細(xì)菌狀態(tài)的代表性預(yù)測(cè)。一般認(rèn)可的做法是，與對(duì)其它微生物試樣相同，對(duì)生物污染的預(yù)測(cè)可受到實(shí)施該試驗(yàn)使用的儀表與規(guī)程的影響。因此從采樣中計(jì)數(shù)活粒子只能在經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)后以經(jīng)過(guò)確認(rèn)的適當(dāng)方法實(shí)施。
計(jì)數(shù)活粒子的信息見(jiàn)相應(yīng)的文件[13：14]
5．5．2??特征化
細(xì)菌監(jiān)控不可能對(duì)控制環(huán)境[7]中全部細(xì)菌污染進(jìn)行鑒別和量化。對(duì)生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)包括對(duì)采樣獲得的策生物進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶卣骰Ｌ卣骰某绦蛉Q于采樣區(qū)的臨界性或者調(diào)查是否能保證深入鑒別。將微生物分成幾大類（如按照菌落或細(xì)胞組織，污斑形成特性或其它特點(diǎn)分類）就足夠了。實(shí)施時(shí)，對(duì)相關(guān)微生物的鑒別可采用規(guī)定的微生物的實(shí)驗(yàn)室方法至少做到屬類鑒別。鑒別臨界區(qū)的撮物要優(yōu)先于對(duì)非臨界區(qū)的微生物鑒別。
注：鑒別控制環(huán)境分離出的活粒子可能有助于特定危險(xiǎn)區(qū)事先想到的普通菌群，以及清洗消毒程序、方法和制劑的效果。由鑒別程序收信的信息還可用于調(diào)查污染源，尤其是超過(guò)行動(dòng)限量或在做決策時(shí)。
6??目標(biāo)、報(bào)警和行動(dòng)限量
建議對(duì)危險(xiǎn)區(qū)環(huán)境中通常存在的菌群要有數(shù)、質(zhì)量上的了解，以便對(duì)個(gè)人、工藝、產(chǎn)品或設(shè)備的污染危險(xiǎn)做出判斷，及進(jìn)行有意義的難和采取改正措施。
目標(biāo)、報(bào)警和行動(dòng)限量應(yīng)由潔凈室和/或控制環(huán)境的用戶獨(dú)立制定。應(yīng)根據(jù)危險(xiǎn)區(qū)的等級(jí)劃分和使用現(xiàn)場(chǎng)具體的要求，指定適當(dāng)?shù)纳镂廴鞠蘖?。該限量采用控制環(huán)境的當(dāng)前技術(shù)應(yīng)很容易得到。
注：在控制環(huán)境的起動(dòng)初期，及根據(jù)正式系統(tǒng)確定的間隔期間內(nèi)，應(yīng)審議關(guān)于生物污染水平的數(shù)據(jù)，以制定和/或確定報(bào)警與行動(dòng)限量的基線。該限量應(yīng)與目標(biāo)限量有關(guān)，但也應(yīng)對(duì)它們進(jìn)行審議并做出適當(dāng)調(diào)整。
7??效果的表達(dá)與解釋
生物污染的數(shù)量預(yù)測(cè)完成后，液體的每份采樣（或計(jì)數(shù)單位）的活實(shí)體（單位）數(shù)用活體單位（VU）來(lái)表達(dá)，或者如果采用菌落計(jì)數(shù)、以菌落形成單位（CFU）來(lái)評(píng)估，則推廣到SI測(cè)量單位（如ｍ3，dｍ2，m，等）。數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)的有關(guān)資料見(jiàn)ISO 14698-2。
由于細(xì)菌環(huán)境監(jiān)控方法存在公認(rèn)的限制，對(duì)生物污染的審議要延長(zhǎng)時(shí)間，以決定趨勢(shì)是否確定。隨后可根據(jù)以上趨勢(shì)評(píng)價(jià)和解釋控制環(huán)境的生物污染狀態(tài)。根據(jù)對(duì)以上調(diào)查和具體生物試驗(yàn)結(jié)果的審議，對(duì)因要求產(chǎn)生的結(jié)果的重要性和操作或按該條件加工的產(chǎn)品的可接受性做出決定。
危險(xiǎn)區(qū)的微生物分類要按總生物污染的目標(biāo)限量確定進(jìn)行，這包括了空氣、流體、表面、織物和設(shè)備的細(xì)菌含量。
8??驗(yàn)證
根據(jù)4ｆ，要定期檢查監(jiān)控生物污染的結(jié)果，以確認(rèn)選定的系統(tǒng)按規(guī)程發(fā)揮作用，以及指定的要求得到了滿足。這樣做可能要增加試驗(yàn)及對(duì)各項(xiàng)工作步驟和設(shè)備進(jìn)行系統(tǒng)的驗(yàn)證，以保證系統(tǒng)具有良好的功能。
如果難表明偏離了規(guī)定限量，或者控制環(huán)境的微生物狀態(tài)起了變化，應(yīng)實(shí)施改正。必要時(shí)要修改系統(tǒng)。
9??鑒定、認(rèn)證和再認(rèn)證
對(duì)選定的系統(tǒng)進(jìn)行鑒定是認(rèn)證過(guò)程的一部分。
注：有關(guān)微生物認(rèn)證的方法資料見(jiàn)[15：16]
10??文件
文件應(yīng)包括或參閱以下內(nèi)容：
a）??采樣類型；
b）??使用的試驗(yàn)方法，以及必要時(shí)提供標(biāo)準(zhǔn)的編號(hào)和標(biāo)題；
c）??使用的采集裝置；
d）??采樣點(diǎn)；
e）??采樣時(shí)進(jìn)行的活動(dòng)類型，包括人員進(jìn)入狀態(tài)；
f）??視情況可提供采樣區(qū)內(nèi)人數(shù)；
g）??采樣日期及必要是時(shí)采樣時(shí)間；
h）??視情況提供采樣用時(shí)；
i）??采樣查驗(yàn)日期；
j）??培養(yǎng)的條件和時(shí)長(zhǎng)；
k）??與所說(shuō)試驗(yàn)方法不一致的地方和可能已影響到結(jié)果的因素；
l）??初次和末次讀出后采集標(biāo)本檢查的試驗(yàn)結(jié)果；
m）??完成數(shù)量試驗(yàn)后，VU數(shù)要推廣到相應(yīng)的SI測(cè)量單位；
n）??如果已特征化，要有提取物的說(shuō)明；
o）??負(fù)責(zé)試驗(yàn)報(bào)告的組織名稱和試驗(yàn)完成日期；
p）??負(fù)責(zé)試驗(yàn)的人員姓名和簽字。
附件A（標(biāo)準(zhǔn)）
生物污染測(cè)量方法的原則
A．1??序言
本附件列出了在需要生物污染控制的環(huán)境下表面生物污染分析、測(cè)量和評(píng)估須遵守的原則。為了探測(cè)存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
本標(biāo)準(zhǔn)描述了應(yīng)用潔凈技術(shù)的危險(xiǎn)區(qū)生物污染評(píng)估與控制的一般原則與基本方法，對(duì)生物污染的評(píng)估應(yīng)與本標(biāo)準(zhǔn)一道進(jìn)行。
此外，還要考慮以下因素：
a）?采樣設(shè)備與方法；
b）?采樣效率；
c）?儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中采樣活粒子的存活；
d）?結(jié)果表達(dá)。
A．2??原則
危險(xiǎn)區(qū)細(xì)菌污染的探測(cè)與監(jiān)控方法是按照采樣計(jì)劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。
A．3??選擇采樣裝置
由于生物污染的采集與預(yù)測(cè)有多種方法和相關(guān)裝置，因此采樣裝置的選擇應(yīng)根據(jù)監(jiān)控區(qū)的情況預(yù)先判別。選擇特定的用途應(yīng)考慮以下重要因素：
a）?要進(jìn)行采樣的活粒子類型（營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和/或細(xì)菌及/或真菌孢子）；
b）?活粒子對(duì)采樣過(guò)程的敏感性；
c）?活粒子的預(yù)期濃度；
d）?原生菌群；
e）?混合種群；
f）?探測(cè)少量生物污染的能力；
g）?采樣危險(xiǎn)區(qū)周圍環(huán)境條件；
h）?采樣時(shí)間與耗時(shí)；
i）?采樣方法，采樣培養(yǎng)基的材料和特性；
j）?采集精度與效率；
k）?培養(yǎng)及活粒子探測(cè)和評(píng)估方法；
l）?要得到的信息類型（如數(shù)量、質(zhì)量方面）。
A．4??采樣方法
由于要采樣的成分有多種類型，也有一些對(duì)它們進(jìn)行采樣的方法[2；4；5；8]，選定的方法要考慮由環(huán)境和要使用的監(jiān)控設(shè)備主導(dǎo)的限制。在對(duì)活粒子進(jìn)行采樣時(shí)，應(yīng)考慮以下重要因素：
a）?采集，粒子去除和/或捕集的效率；
b）?采集與儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中活粒子的存活；
c）?必要時(shí)要考慮萃取/沖洗液。
A．5??采樣
代表性樣品的采集所使用的方法和容器不應(yīng)增加和/或抑制固有的生物污染。（見(jiàn)5.3）
附錄B
（參考）
氣懸浮生物污染測(cè)量方法指導(dǎo)
B．1??序言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下空氣懸浮生物污染的分析與測(cè)量技術(shù)。為了探測(cè)存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
氣懸浮生物污染的評(píng)估遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時(shí)要建立評(píng)估和控制生物污染的正式系統(tǒng)。
對(duì)危險(xiǎn)區(qū)氣懸浮生物污染的評(píng)估原則和方法進(jìn)行了說(shuō)明。
采樣裝置的鑒定技術(shù)見(jiàn)附件C（參考）。
B．2??原則
當(dāng)危險(xiǎn)區(qū)為空態(tài)、靜態(tài)、適當(dāng)?shù)目梢允褂脩B(tài)和常規(guī)的正常使用時(shí)，危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)空氣的細(xì)菌污染探測(cè)和監(jiān)控方法是按采樣計(jì)劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。通過(guò)對(duì)采集培養(yǎng)基的直接震動(dòng)或采用專用膜過(guò)濾器過(guò)濾（對(duì)以上膜進(jìn)行后續(xù)處理）采集粒子。
B．3??采樣裝置
空氣懸浮活粒子的采集和計(jì)數(shù)有各種方法和采樣裝置[17；24；28]；特殊方法、材料和裝置的選用取決于采樣的目的。氣溶膠采樣的效率會(huì)受到粒子動(dòng)量的影響，（質(zhì)量與速率的產(chǎn)物）；因此在選擇適當(dāng)?shù)姆椒ê驮O(shè)備[17；18；21-28]時(shí)需格外注意。
采樣裝置分為兩類：
1）????????無(wú)源采樣裝置，如沉淀盤，（涂敷玻璃或金屬盤或滑動(dòng)片和布；
2）????????有源采樣裝置，如震動(dòng)和液體捕集采樣器和過(guò)濾采樣器。
以上裝置的生產(chǎn)廠家須提供使用說(shuō)明書(shū)和使用限制。
B．3．1??選擇采樣裝置
采樣率，采樣時(shí)長(zhǎng)和選定的采樣裝置可能會(huì)對(duì)采集的微生物的存活性產(chǎn)生很大的影響。沖擊裝置可能不適合對(duì)空氣懸浮活粒子的采樣，因?yàn)槿萘啃?，采樣率低并且容易打碎活粒子團(tuán)[21]。
由于投入商業(yè)使用的細(xì)菌空氣采樣系統(tǒng)數(shù)量大、種類多，所有系統(tǒng)又都有各自不同的物理和生物效率[19；32]，因此在選擇特定的用途時(shí)應(yīng)至少考慮以下因素：
a）???需采樣的活粒子的類型（細(xì)菌和/或真菌的孢子和/或營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞）[32]
b）???活粒子對(duì)采樣程序的敏感度
c）???期望的活粒子濃度
d）???探測(cè)生物污染量多少的能力
e）???用于所期望微生物的適當(dāng)培養(yǎng)基
f）???采樣時(shí)間與耗時(shí)
g）???采樣環(huán)境的周圍環(huán)境條件
h）???采樣器對(duì)單向氣流的干擾
i）???采樣器的特性，如：
1）????對(duì)于低含量空氣懸浮活粒子的適當(dāng)采吸流量
2）????適當(dāng)?shù)恼饎?dòng)/氣流速度
3）????采樣精度與效率
4）????易于搬運(yùn)（重量，體積）和操作（使用方便，輔助設(shè)備，對(duì)真空泵的依賴，水、電等）
5）????易于清洗、消毒或滅菌
6）????對(duì)要測(cè)量的生物污染不會(huì)自然增加活粒子
來(lái)自采樣器的排氣不應(yīng)污染潔凈室。
B．3．2??無(wú)源細(xì)菌采樣裝置（沉淀式采樣裝置）
無(wú)源細(xì)菌空氣采樣器（重力沉淀采樣器）如沉淀盤，不測(cè)量空氣中活粒子的總數(shù)，只測(cè)量活粒子污染表面的速度。因此沉淀盤可用于對(duì)產(chǎn)品的氣懸浮污染進(jìn)行數(shù)、質(zhì)量的評(píng)估。先按單位時(shí)間確定沉淀盤的計(jì)數(shù)，然后將產(chǎn)品暴露的面積和時(shí)間與沉淀盤的相聯(lián)系，即可算出產(chǎn)品可能受到的污染量[28-30]。
以上裝置沒(méi)有總氣懸浮粒子的數(shù)量監(jiān)控值，因?yàn)樗鼈儫o(wú)法探測(cè)不沉淀到培養(yǎng)基表面的微生物，而且活粒子群的沉淀速度會(huì)受到氣流及其擾動(dòng)的影響。沉淀盤只應(yīng)從數(shù)量、質(zhì)量方面評(píng)估[21]因重力沉淀于特定使用場(chǎng)內(nèi)的空氣懸浮粒子對(duì)產(chǎn)品/裝置/表面的可能污染情況[28；29；30]（見(jiàn)附件D）。
B．3．3??有源細(xì)菌采樣器
為評(píng)估空氣的細(xì)菌質(zhì)量，需要在危險(xiǎn)區(qū)使用有源空氣采樣裝置。有幾種商用的有源裝置，每種都有自己的限制。為了測(cè)量特殊情況如通風(fēng)管和單向氣流中的空氣生物污染，應(yīng)在等動(dòng)力狀態(tài)下進(jìn)行采樣。如果采樣不是等動(dòng)力的，得到的就可能是無(wú)代表性的、數(shù)量偏大的大粒子。如果吸管與氣流方向形成角度，也會(huì)引起活粒子的失真分布。進(jìn)入測(cè)量裝置的抽氣速率應(yīng)與周圍空氣移動(dòng)的速率相同且與氣流方向一致。
大多數(shù)的采樣器都有固定的真空入口方向，可以是垂直的（面朝下），也可以是水平的。有的采樣器有可移動(dòng)的入口。入口速率通常是固定的；但是，在不同裝置之間入口速率會(huì)有很大區(qū)別，這一點(diǎn)在選擇設(shè)備時(shí)應(yīng)加以考慮。
采樣時(shí)，采樣點(diǎn)的空氣移動(dòng)方向可采用煙玻管來(lái)記錄。
有的采樣器不適于等動(dòng)力采樣，選擇時(shí)應(yīng)考慮監(jiān)控要求。根據(jù)采樣原理，有兩種主要采樣方法和相應(yīng)的設(shè)備適用于生物污染正常的的危險(xiǎn)區(qū)（低含量），即震動(dòng)采樣器和過(guò)濾采樣器。
B．3．3．1??震動(dòng)和液體捕集采樣器
由于有多種震動(dòng)和液體捕集或沖擊采樣器可用于探測(cè)活粒子的高低濃度[19；30]，選用的裝置應(yīng)有以下特點(diǎn)：
a）??撞擊培養(yǎng)基的采樣空氣的震動(dòng)速度是以下兩種情況之間的折衷，1）速率高，足以采集到約1μｍ的活粒子，2），速率低，足以避免因機(jī)械損傷或打碎細(xì)菌或微小真菌團(tuán)引起的活粒子存活性的下降；
b）??抽氣流量，它決定著采樣時(shí)間，是兩方面因素的折衷，即需要足夠的采樣量以探測(cè)含量很低的生物污染和避免大量采樣會(huì)使采集培養(yǎng)基的物理與生物特性發(fā)生重大改變；
c）??在生物污染較重區(qū)，請(qǐng)適當(dāng)選用震動(dòng)方法和采樣量，以得到能夠解讀結(jié)果數(shù)據(jù)的單獨(dú)的菌群[20]。
采樣裝置至少要符合以下要求：
a）?在適當(dāng)時(shí)間內(nèi)采集1ｍ3、而又不會(huì)使采樣培養(yǎng)基明顯干燥的足夠流量，如約100L/min；
b）?對(duì)培養(yǎng)基的中等震動(dòng)程度，如<20m/s。
B．3．3．2??過(guò)濾采樣器
過(guò)濾采樣裝置廣泛用于氣溶膠采樣。通過(guò)適當(dāng)選擇送氣機(jī)、過(guò)濾器介質(zhì)和過(guò)濾器尺寸，在給定的采樣時(shí)間內(nèi)幾乎可做任意量的采樣。
由于采用脫水方法，過(guò)濾可能會(huì)降低某些種類微生物的存活性，因此，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸悠髟O(shè)計(jì)十分重要。過(guò)濾器通過(guò)若干原理從大氣中或氣流中去除粒子。這些原理有直接攔截，慣性處理，擴(kuò)散沉積，靜電吸附和重力吸引。在給定情況下起決定作用的原理取決于流量、過(guò)濾器性質(zhì)和氣溶膠性質(zhì)。
對(duì)于過(guò)濾采樣裝置的設(shè)計(jì)和使用，請(qǐng)考慮以下重要因素：
a）??沒(méi)有影響活粒子震動(dòng)過(guò)濾膜速度的靜電；
b）??保證適用的限制或抽氣流量及震動(dòng)空氣速度與B．3．3．1相同；
c）??保證過(guò)濾膜架與真空源連接，帶有測(cè)量采吸率的裝置，不污染過(guò)濾器材料；
d）??保證過(guò)濾膜架可在無(wú)菌狀態(tài)下放置于過(guò)濾器架上，并可在過(guò)濾掉所需量的空氣后以無(wú)菌的方式取下，可直接放到培養(yǎng)基上或者如果是膠質(zhì)過(guò)濾膜，則按以下要求實(shí)施辦法：
1）????建議方法：將濾膜溶于培養(yǎng)皿內(nèi)2.5ml的無(wú)菌氯化鈉緩沖液中（0.9%v/v）。適當(dāng)搖動(dòng)培養(yǎng)皿后將其置于培養(yǎng)箱內(nèi)，以適當(dāng)溫度培養(yǎng)1到20分鐘以促進(jìn)溶解。使用該溶液的一份等分試樣接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上以適當(dāng)溫度培養(yǎng)。
2）????替代方法：將濾膜直接放到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上以適當(dāng)溫度培養(yǎng)。
進(jìn)行生物氣溶膠[20]采樣時(shí)，請(qǐng)考慮環(huán)境條件和過(guò)濾器要求的限制，如：
a）??溫度；
b）??含水量；
c）??人工制品配方；
d）??過(guò)濾器尺寸；
e）??過(guò)濾器機(jī)械特性；
f）??從采樣點(diǎn)到實(shí)驗(yàn)室的輸送條件；
g）??只針對(duì)活粒子的計(jì)數(shù)限制。
B．4??結(jié)果的表述
建議活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1m3。
附件C（參考）
空氣采樣器效率的評(píng)估與鑒定指導(dǎo)
C．1引言
本附件提供的指導(dǎo)和技術(shù)說(shuō)明涉及對(duì)空氣生物污染測(cè)量所用空氣采樣器的評(píng)估與鑒定．通常，這項(xiàng)工作由空氣采樣器的廠家或第三方試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成．
細(xì)菌空氣采樣器的總效率是兩方面不同因素的產(chǎn)物：
a)??物理效率；
b)??生物效率：
震動(dòng)采樣器的物理效率取決于粒子的特點(diǎn)，包括粒徑、形狀和密度：生物效率取決于若干因素，如：
a)??采集到的活粒子的類型；
b)??活粒子的生長(zhǎng)特點(diǎn)：
c)??活粒子的代謝活動(dòng)；
d)??預(yù)空氣處理：
c)??大氣條件(包括溫濕度)
f)??氣溶膠的種類和存在時(shí)間：
g)??捕集機(jī)制和采樣時(shí)間[25]
因此在使用細(xì)菌采樣器了解以上兩點(diǎn)效率因素并擁有它們的特點(diǎn)數(shù)據(jù)是十分重要的，這可使采樣器按用途得到鑒定，及根據(jù)采樣得到的污染結(jié)果與潛力有關(guān)。
C．2鑒定的原則
為了對(duì)裝置做出鑒定，要對(duì)生物氣溶膠的物理與生物效率進(jìn)行特征化，要考慮的問(wèn)題有：
a)在適當(dāng)房間內(nèi)可能遇到粒子范圍采集氣溶膠粒子的物理效率；
b)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性茵和孢子的生物效率。如果需要對(duì)危防區(qū)真菌污染探測(cè)采樣器進(jìn)行鑒定，應(yīng)包括對(duì)酵母生物氣溶膠樣品的采集：
一在環(huán)境控制區(qū)內(nèi)；
一有標(biāo)準(zhǔn)生物氣溶膠：
—采用產(chǎn)生和保持生物氣溶膠空氣懸浮狀態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)方法；按指定的環(huán)境參數(shù)[21]。
注：有些空氣懸浮微生物，尤其是無(wú)性繁殖的代謝式活性菌在采集過(guò)程中常常失去活性。
C．3采樣器與試驗(yàn)條件
C．3．1試驗(yàn)區(qū)
試驗(yàn)區(qū)應(yīng)帶高效過(guò)濾器出風(fēng)口和排風(fēng)，并應(yīng)以負(fù)壓運(yùn)行。
溫度應(yīng)保持在(22+2)℃，相對(duì)濕度應(yīng)在(50+10)％。試驗(yàn)區(qū)的儀器在操作時(shí)不得有人員進(jìn)入該區(qū)。．
C．3．2生物氣溶膠
為便于測(cè)量，試驗(yàn)用氣溶膠應(yīng)為非病原性的，應(yīng)有良好的生存和存儲(chǔ)特性，即遺傳上是穩(wěn)定的。
氣溶膠采用適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)菌的液體懸浮液制作．試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基可滿足本細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)要求。
C．3．2．2??測(cè)試物理效率的試驗(yàn)菌株
使用的試驗(yàn)菌株應(yīng)為枯草桿菌黑色變種NCTC 10073（=DSM 2277），制備成清洗孢子懸浮液。洗出的孢子應(yīng)置于帶有不同濃度懸浮固體的80%的乙醇中以106到107ml/之間的濃度進(jìn)行離心和懸浮，以便在氣溶膠化時(shí)產(chǎn)生多種粒徑。所需固體濃度的計(jì)算可按以下說(shuō)明：按論文[26]和[27]描述的基本技術(shù)。
C．3．2．3??生物效率
生物效率試驗(yàn)應(yīng)采用活孢子（109VU/ml）和無(wú)性繁殖細(xì)胞的混合物（50：50）。
C．3．2．3．1??試驗(yàn)菌株，革蘭氏陽(yáng)性
建議將嗜酸乳桿菌ATCC 4556（=DSM 20079；=NCIB 8690）作為適宜的試驗(yàn)菌株，代表革蘭氏陽(yáng)性菌。
該有機(jī)物應(yīng)以（36+1）℃在Elliker流體培養(yǎng)基或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基中培養(yǎng)（18+2）小時(shí)。
建議將Elliker瓊脂或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基作為適宜的固體采集培養(yǎng)基，并應(yīng)在（36+1）℃培養(yǎng)。
C．3．2．3．2??試驗(yàn)菌株，革蘭氏陰性
建議將大腸桿菌ATCC 10536（=DSM 682；=NCIB 8879）作為適宜的試驗(yàn)菌株，代表革蘭氏陰性菌。
該有機(jī)物應(yīng)以（36+1）℃培養(yǎng)，應(yīng)將5ml該培養(yǎng)物接種至45ml的新鮮胰化胨大豆流體培養(yǎng)基或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基上，培養(yǎng)4h。然后該流體培養(yǎng)基用作噴灑液以50：50的比例與每ml枯草桿菌黑色變種懸浮液中109的孢子進(jìn)行混合。
使用的固體采集培養(yǎng)基應(yīng)為酪蛋白胨大豆粉胨瓊脂或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基，以（36+1）℃培養(yǎng)。
C．3．2．3．3??酵母試驗(yàn)菌株
注：必要時(shí)，建議將發(fā)面酵母ATCC 9804（=DSM 70478；=NCYC 91；=CBS 4000）一種潔凈室中不一定能找到的酵母作為適宜的試驗(yàn)菌株，代表真菌。
該有機(jī)物應(yīng)以（30+1）℃在麥芽浸膏流體培養(yǎng)基或確認(rèn)的同等培養(yǎng)上培養(yǎng)（18+2）h。然后該流體培養(yǎng)基用作噴灑液以50：50的比例與每ml枯草桿菌黑色變種懸浮液中109的孢子進(jìn)行混合。
使用的采集培養(yǎng)基應(yīng)為麥芽浸膏瓊脂或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基，以（30+1）℃培養(yǎng)。
C．3．3??鑒定
C．3．3．1??物理效率試驗(yàn)
基本技術(shù)在[26]和[27]中有說(shuō)明。
所有氣溶膠化器應(yīng)能產(chǎn)生諸如由陀螺氣溶膠發(fā)生器（STAG）產(chǎn)生的控制粒徑氣溶膠。產(chǎn)生的初始粒徑見(jiàn)等式：
附件D（參考）
表面生物污染的測(cè)量方法指導(dǎo)
D．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下表面生物污染的分析與測(cè)量技術(shù)。為了探測(cè)存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
對(duì)危險(xiǎn)區(qū)表面污染的評(píng)價(jià)原則和方法進(jìn)行了說(shuō)明。
表面生物污染的評(píng)價(jià)遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時(shí)要建立評(píng)價(jià)和控制生物污染的正式系統(tǒng)。
D．2??原則
當(dāng)危險(xiǎn)區(qū)為空態(tài)、靜態(tài)、適當(dāng)?shù)目梢允褂脩B(tài)和在常規(guī)的正常使用時(shí)，危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)空氣的細(xì)菌污染探測(cè)和監(jiān)控方法是按采樣計(jì)劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。通過(guò)對(duì)采集培養(yǎng)基的直接震動(dòng)或采用專用膜過(guò)濾器過(guò)濾（對(duì)以上膜進(jìn)行后續(xù)處理）采集粒子。
D．3??采樣裝置
D．3．1??接觸式采樣裝置
接觸式采樣裝置可用于平滑表面。
可用接觸盤或其它裝在適當(dāng)軟式或硬式容器中的培養(yǎng)基與采樣表面接觸的其它裝置。使用的表面接觸裝置應(yīng)有不小于20cm2的接觸表面。
使用接觸盤的水平采樣點(diǎn)的理想方法如下：培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點(diǎn)接觸不少于10s，向整個(gè)接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動(dòng)。裝置有接觸并拿開(kāi)后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。
D．3．2??間接采樣裝置
采樣活體單位也可采用適當(dāng)?shù)拿掴F技術(shù)[10-12]。采用經(jīng)過(guò)滅菌的潮濕錦釬、海綿或擦布特別適用于大面積、非吸引式、不規(guī)則或接觸裝置無(wú)法使用的凹面的采樣。
也可使用沉淀盤對(duì)懸浮活粒子因重力沉淀于特定使用區(qū)形成的表面污染進(jìn)行數(shù)質(zhì)量評(píng)估。(參考潔凈室http://www.gxshunjiang.com/)
D．3．2．1??棉釬
應(yīng)使用棉釬（最好是合成物[4，5]）先用經(jīng)過(guò)消毒的沖洗介質(zhì)，如緩沖生理鹽水、林格氏溶液或適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基沾濕。在指定采樣區(qū)用潮濕棉釬密排平行擦拭，同時(shí)緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)棉釬。應(yīng)對(duì)相同區(qū)重復(fù)進(jìn)行采樣，用同一棉釬垂直于開(kāi)始的涂抹進(jìn)行涂擦。采樣后，棉釬應(yīng)置于規(guī)定量的適當(dāng)?shù)南緵_洗液中攪動(dòng)。應(yīng)對(duì)該沖洗液做活單位試驗(yàn)（[10]提供了適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)方法）。
D．3．2．2??沉淀盤
必要時(shí)，可先用裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的沉淀盤確定在給定時(shí)間內(nèi)通過(guò)重力作用從空氣沉淀到表面的帶菌粒子數(shù)；然后該盤送去培養(yǎng)。此法不測(cè)量空氣中含有的細(xì)菌總數(shù)，只測(cè)量在采樣期間沉淀在表面的細(xì)菌數(shù)。使用大口徑的培養(yǎng)皿（即14cm直徑）并延長(zhǎng)接觸時(shí)間可提高此方法的靈敏度，但要防止培養(yǎng)基脫水（[16]提供了適當(dāng)?shù)姆椒ǎ?/p>
D．4??結(jié)果的表述
建議表面活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1dm2，或者如果使用沉淀盤，則推廣到1dm2/h(1dm2=100cm2)。
附件E（參考）
織品生物污染的測(cè)量方法指導(dǎo)
E．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下織品生物污染可能選用的分析與測(cè)量技術(shù)。
對(duì)危險(xiǎn)區(qū)織品污染的評(píng)價(jià)原則和方法進(jìn)行了說(shuō)明。
織品生物污染的評(píng)價(jià)遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時(shí)要建立評(píng)價(jià)和控制織品生物污染的正式系統(tǒng)。
為了探測(cè)和監(jiān)控織品上或從織品脫落的活粒子，本評(píng)價(jià)涉及采集代表性采樣。在危險(xiǎn)區(qū)使用的織品應(yīng)有足夠的潔凈度以適于其使用的活動(dòng)和用途。應(yīng)當(dāng)對(duì)織品的生物污染進(jìn)行監(jiān)控以減少對(duì)危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)活動(dòng)、產(chǎn)品、裝置等構(gòu)成不利影響的危險(xiǎn)。
關(guān)于織品的選擇，以了解危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)相關(guān)生物污染的情況，以及對(duì)該生物污染的評(píng)價(jià)，應(yīng)考慮以下重要因素：
a)????????織品的種類與形式，如保護(hù)衣，擦布等；
b)???????織物選擇；
c)????????織物的粒子產(chǎn)生與擴(kuò)散特點(diǎn)；
d)???????因織物特性形成的阻隔作用不足；
e)????????織品的清洗處理；
f)????????從織品上清除粒子的效率；
g)???????織品的設(shè)計(jì)；
h)???????織品的可滲透率和表面條件。
如果發(fā)現(xiàn)織品的生物污染超量，要采用適當(dāng)?shù)姆椒ú檎铱赡艿脑?。一般原因可能有?/p>
a)??因織物特性如纖維類型、編織或設(shè)計(jì)引起的粒子不良滯留；
b)??使用不當(dāng)，如衣服更換不勤；
c)??除污染不充分和/或清洗效果不好；
d)??危險(xiǎn)區(qū)微生物限制的織品清洗周期不適當(dāng)。
本附件提供的指導(dǎo)不用于確定活粒子對(duì)織物的滲透率，為此需用其它技術(shù)[34]。此外，本附件不涉及某些用途可能需要的特定方面的織品，如經(jīng)滅菌和去粒子的織物，也不涉及由目檢或觸摸判別的織品質(zhì)量。
E．2??原則
危險(xiǎn)區(qū)織品細(xì)菌污染通過(guò)使用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置按采樣計(jì)劃采集活粒子實(shí)施探測(cè)和監(jiān)控。采集活粒子可用直接接觸或間接采集法，如使用膜過(guò)濾技術(shù)。
E．3??采樣裝置
本章說(shuō)明的多種采樣方法在用來(lái)除粒子時(shí)可能會(huì)有很大的不同。
E．3．1??接觸式采樣裝置
為確定織品上的活粒子，可使用適當(dāng)?shù)慕佑|式裝置（見(jiàn)附件D），包括可用于小織品的裝置。
如果使用的采樣裝置在支托上用了脫水培養(yǎng)基，可按廠家指定的液量或使用使洗滌劑和/或消毒劑滅活或中和的溶液進(jìn)行再水化。
E．3．2??膜過(guò)濾采樣裝置
織品表面的活粒子采樣可用帶有適當(dāng)膜過(guò)濾器的膜過(guò)濾架進(jìn)行[35；36]，此處，織物放在有膜過(guò)濾器的膜過(guò)濾架開(kāi)口處，空氣經(jīng)采吸經(jīng)過(guò)織物。然后檢查膜過(guò)濾器的活粒子。
E．4??結(jié)果的表述
建議表面活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1dm2的采樣織品(1dm2=100cm2)。
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附件F（參考）
洗衣驗(yàn)證方法指導(dǎo)
F．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下洗衣過(guò)程的驗(yàn)證技術(shù)。
F．2??測(cè)試方法
F．2．1原則
驗(yàn)證需要使用若干片與送洗織物同種的材料．以上織物片要經(jīng)過(guò)已測(cè)量數(shù)量的己知微生物的污染，然后送去經(jīng)歷要被驗(yàn)證的洗滌過(guò)程。要檢查該過(guò)程能否去除105的細(xì)菌數(shù)和104的酵母和真菌孢子數(shù)。
要進(jìn)行以下控制：
a)??控制A：計(jì)數(shù)初期微生物懸浮液的話單位?？刂艫為了表明微生物的量初數(shù)量達(dá)到一定的高度，以測(cè)量是否將微生物降至所需的數(shù)量；
b)??控制B：計(jì)數(shù)控制織物片的活單位數(shù)，該織物片除了洗衣過(guò)程外．要經(jīng)歷過(guò)與試驗(yàn)片完全相同的過(guò)程。控制B是為了表明微生物的存活性在驗(yàn)證期間不發(fā)生變化；
c）??控制c；計(jì)數(shù)控制織物片的活單位數(shù)，該織物片要經(jīng)歷過(guò)與試驗(yàn)片完全相同的過(guò)程，包括洗衣過(guò)程．但只是在洗衣后受到了微生物懸浮液的污染?？刂艭是為了表明計(jì)數(shù)微生物數(shù)的技術(shù)適用于該工藝條件(時(shí)間，機(jī)械作用，溫度，織物上有無(wú)清洗產(chǎn)品殘留物等)。
試驗(yàn)中已知微生物的懸浮液足以蛋白溶液制備的．試驗(yàn)片涂上己知量的懸浮液，與普通織物一起送洗．洗完后計(jì)數(shù)試驗(yàn)片上的微生物數(shù)．測(cè)量微生物的減少量并與(F．2．1)中提到的值進(jìn)行比較．
注：在評(píng)估認(rèn)可對(duì)試驗(yàn)洗衣過(guò)程的驗(yàn)證前，該過(guò)程的產(chǎn)品不得用于潔凈室．
F．2．2微生物
F．2．2．1細(xì)菌
至少應(yīng)使用以下細(xì)菌菌株：
a)腸球菌hirae ATCCl0541
b)大腸桿菌ATCCl0536
F.2. 2. 2真菌
如果要?dú)⒄婢?，至少要使用以下真菌菌株?/p>
白色念珠菌ATCC2091
黑曲霉ATCCl6404
F．22 3細(xì)菌孢子
如果要?dú)珂咦樱辽僖褂靡韵戮赕咦樱?/p>
枯草桿菌黑色變種ATCC9372
F．2．3細(xì)菌懸浮液
F．2．3．1懸浮液介質(zhì)
應(yīng)使用滅菌胨鹽水作為細(xì)菌懸浮液的介質(zhì)。對(duì)于真曲，加005％(容積比)多乙氧基醚。細(xì)菌孢子應(yīng)使用滅菌蒸餾水。
F．2．?2。?3??回收介質(zhì)
可使用懸浮液介質(zhì)、蒸餾水或可在試驗(yàn)條件下被過(guò)濾的任何溶液。如果必須用殺菌中和劑，可將其加在回收介質(zhì)中．
F．2．3．3蛋白溶液
要制備以下溶液：
一溶液A: 3％(W／V)牛清蛋白(Cobh氏餾份v)，需要時(shí)調(diào)到pH=6．8，采用膜過(guò)濾消毒；
一溶液B：15％(W／V)的酵母提取物，調(diào)到pH=7，以121℃蒸煮20分鐘：
一溶液C：A和B兩種溶液按100：20的比例混合，使每種蛋白的濃度為2．5％(w/V)。
F．2．4控制與測(cè)試織物片
織物片采用脫漿的織物制成，該織物片須代表洗滌過(guò)程要驗(yàn)證的送洗織物．它們只應(yīng)使用一次?？椢锲恼麄€(gè)尺寸為l0cm×5cm，包括5x5cm的污染區(qū)和用于將其固定于送洗織物的多余邊。
織物片用蒸汽可穿透的材料包裹，以121℃蒸煮20mm。
F．2．5培養(yǎng)液的制備
制備每ml含I09的細(xì)菌細(xì)胞或108的真菌細(xì)胞或細(xì)菌孢子懸浮液．
F．2．6程序
F．2．6．1控制
控制A；培養(yǎng)懸浮液經(jīng)適當(dāng)稀釋后計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基中的雙份VU，含育30-300VU／ml的稀釋液中兩個(gè)計(jì)數(shù)的平均值為N。檢查原始懸浮液的數(shù)字是否為細(xì)菌細(xì)胞為≥109／ml真菌細(xì)胞或細(xì)菌孢子為108／ml．
控制B：使用適當(dāng)?shù)南♂屢?，用含?0-300VU／ml的0.5ml的懸浮液培養(yǎng)兩個(gè)控制片，用含有300-3000VU／ml的0.5ml的懸浮液培養(yǎng)另外兩個(gè)控制片．這四個(gè)控制片在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，除了不參與洗衣過(guò)程，其它時(shí)候均與試驗(yàn)片一起處理和試驗(yàn)．回到實(shí)驗(yàn)室后，它們要放到培養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)．計(jì)數(shù)VU．與污染最嚴(yán)重的控制片對(duì)應(yīng)的平均計(jì)數(shù)為N’1，另一個(gè)為N’2?
控制C：在一個(gè)控制片上涂0,5ml的蛋白溶劑C。進(jìn)行全過(guò)程洗衣．然后浸沒(méi)在l00ml回收介質(zhì)中撞動(dòng)15-30秒，放到培養(yǎng)皿上沉淀。接著在該控制片上涂含有30-300VU／ml的lml的懸浮液，將其用10ml的瓊脂培養(yǎng)基覆蓋、培養(yǎng)后計(jì)數(shù)．該計(jì)數(shù)為n1。用能夠阻擋微生物的濾膜過(guò)濾先前使用的100ml回收介質(zhì)．沖洗三遍，在過(guò)濾膜上覆蓋50ml的新回收介質(zhì)．在50ml的回收介質(zhì)中加Iml的含30-300VU／ml的懸浮液，然后過(guò)濾。膜與過(guò)濾器再用另外5ml的回收介質(zhì)沖洗，然后過(guò)濾。
將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)．該計(jì)數(shù)為n2計(jì)算
n=(n1+n2)/2。
如果N≈N’2≈n，就只為試驗(yàn)本身驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)條件．
如果N’2≤0.5N和或N’1≤0．05N和／或n≤0．5N，就不只為試驗(yàn)本身驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)條件．重新進(jìn)行控制，如添加適當(dāng)?shù)幕衔镆灾泻退拖纯刂破幕瘜W(xué)殘留物．
F．2．6．2測(cè)試
將3ml微生物懸浮液(F.2.5)和2ml(F.2.3 3)中的蛋白溶液C混合并在環(huán)境溫度下保持接觸5min．將產(chǎn)生的0.5ml的懸浮液涂到試驗(yàn)片上。為測(cè)試每個(gè)受試的微生物，要使三個(gè)試驗(yàn)片接受污染．
送洗后，要盡快將控制片送回到實(shí)驗(yàn)室．每一片要放入100ml的回收介質(zhì)內(nèi)，攪拌15至30s．
然后：
a)0.1ml放入9.9ml回收介質(zhì)后攪拌。然后該混合物放到濾膜上．用50ml新回收介質(zhì)沖洗三次．將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)；
b)將lml放到濾膜上，用50ml新回收介質(zhì)沖洗三次，將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)：
c)剩余的98.9ml放到站膜上，用50ml新回收介質(zhì)沖洗三次，將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)：
d)每個(gè)試驗(yàn)片以無(wú)菌方式放到一個(gè)培養(yǎng)皿上,用瓊脂培養(yǎng)基覆蓋并培養(yǎng)。
n’1為各膜上確定的VU數(shù)，是F.2.6.2中a)，b)，c)產(chǎn)生的計(jì)數(shù)平均值。
n’2是F.2.6.2中d)試驗(yàn)片確定的VU平均數(shù)．
因此是送洗后殘留微生物的數(shù)字．
F．2.7結(jié)果的解釋
計(jì)算涂到控制片上微生物數(shù)N與R的比率檢查送洗是否可保證減少細(xì)茵數(shù)的105因數(shù)和減少酵母菌及真菌孢子數(shù)104。
附件G（參考）
液體生物污染的測(cè)量方法指導(dǎo)
G．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下液體（水的或非水的）生物污染的評(píng)價(jià)技術(shù)。為了探測(cè)存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
液體生物污染的評(píng)價(jià)遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的一般原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時(shí)要建立評(píng)價(jià)和控制液體生物污染的正式系統(tǒng)。此外，應(yīng)考慮以下因素[37-43]：
a)????????危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)細(xì)菌生態(tài)及相關(guān)參數(shù)；
b)???????特定液體中活粒子的希望濃度；
c)????????液體條件；
d)???????采集的精確性與效率。
G．2??原則
當(dāng)危險(xiǎn)區(qū)處于準(zhǔn)備就緒、可以使用狀態(tài)時(shí)，應(yīng)按正常使用情況下適當(dāng)和例行的做法通過(guò)用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置按采樣計(jì)劃對(duì)危險(xiǎn)區(qū)中液體的細(xì)菌污染進(jìn)行探測(cè)和監(jiān)控。可采用直接或間接技術(shù)實(shí)施活粒子的數(shù)量質(zhì)量探測(cè)。
G．3??過(guò)程
確定液體生物污染有各種方法，選擇哪種方法取決于液體的性質(zhì)和需要采樣的量，比如可以使用灌澆平碟，展寬平碟，膜過(guò)濾和其它方法。
采樣時(shí)液體壓力要適當(dāng)降低，應(yīng)注意液體條件和液體中活單位的期望濃度。
G．3．1??采樣準(zhǔn)備
根據(jù)液體和生物污染的程度，試樣的測(cè)試可直接或在適當(dāng)處理后進(jìn)行。
G．3．2??采樣
選擇的生物污染探測(cè)方法應(yīng)與要采樣液體的性質(zhì)相適應(yīng)，可能需要以下技術(shù)：
a）??直接培養(yǎng)，如展寬平碟，系列稀釋（MPN方法）；
b）??間接培養(yǎng)，如采用膜過(guò)濾方法的采樣濃度，該法有后續(xù)培養(yǎng)或帶放射標(biāo)簽基質(zhì)及放射活性測(cè)量；
c）??細(xì)菌ATP測(cè)量；
d）??阻抗測(cè)量。
G．4??結(jié)果表述
建議表面活粒子數(shù)的表述采用活單位（VU），推廣到1ml(或1cm3)。
附件H（參考）
培訓(xùn)指導(dǎo)
H．1??引言
本附件提供指導(dǎo)并描述潔凈室生物污染控制和相關(guān)控制環(huán)境下人員培訓(xùn)的適當(dāng)技術(shù)。
對(duì)質(zhì)量管理各項(xiàng)內(nèi)容的基本貢獻(xiàn)和關(guān)鍵是對(duì)按本標(biāo)準(zhǔn)使用選用系統(tǒng)人員進(jìn)行連續(xù)、有組織和適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)。各有關(guān)人員須經(jīng)過(guò)適當(dāng)培訓(xùn)，以保證一致、可靠和可重復(fù)的結(jié)果和服務(wù)提供。要對(duì)參與微生物監(jiān)控和實(shí)驗(yàn)室分析的人員，包括分包商的人員，給與適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)。
培訓(xùn)要求編寫可用的規(guī)程和配有文件的培訓(xùn)材料，記錄使用的性能成分及培訓(xùn)驗(yàn)證系統(tǒng)[44]。培訓(xùn)可在機(jī)構(gòu)內(nèi)實(shí)施或由獨(dú)立機(jī)構(gòu)在外部實(shí)施。
本附件不提供能力評(píng)價(jià)、表現(xiàn)水平、表現(xiàn)評(píng)價(jià)或完整人員培訓(xùn)的標(biāo)準(zhǔn)，而用于指出生物污染控制領(lǐng)域或培訓(xùn)和驗(yàn)證周期中包括的最重要活動(dòng)和內(nèi)容。
H．2??標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)的內(nèi)容
凡規(guī)程保證之處都要編寫培訓(xùn)文件，該文件要詳細(xì)說(shuō)明單個(gè)步驟或程序。第一步應(yīng)進(jìn)行細(xì)分以充分描述以上步驟所需的培訓(xùn)范圍和內(nèi)容。
H．2．1??培訓(xùn)文件
培訓(xùn)文件應(yīng)考慮以下方面：
a）??培訓(xùn)中要用的文件和參考項(xiàng)列表；
b）??要使用的培訓(xùn)目標(biāo)及方法的說(shuō)明與定義；
c）??每個(gè)程序步驟的詳細(xì)說(shuō)明，以充分理解實(shí)施該步驟的要求；
d）??必要時(shí)的測(cè)量結(jié)果；
e）??計(jì)劃的培訓(xùn)課程，是否在內(nèi)部還是設(shè)施外；
f）??性能標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)的說(shuō)明。
應(yīng)為選定的系統(tǒng)編寫統(tǒng)一的培訓(xùn)手冊(cè)，而非為每個(gè)程序或試驗(yàn)編制單獨(dú)的指南。應(yīng)采用統(tǒng)一文件格式，重點(diǎn)在有關(guān)程序上，避免過(guò)多綜合性的背景介紹。
H．2．2??培訓(xùn)手冊(cè)
部門或組織就將有關(guān)某個(gè)區(qū)域或設(shè)施的各培訓(xùn)文件分成單個(gè)手冊(cè)，以作為培訓(xùn)手冊(cè)。這一手冊(cè)應(yīng)將程序的細(xì)節(jié)轉(zhuǎn)成單獨(dú)的、可清楚理解的步驟，并使之標(biāo)準(zhǔn)化，以達(dá)到合格的性能。
培訓(xùn)手冊(cè)一般應(yīng)用于以下目的：
a）??培訓(xùn)新雇員；
b）??采用新方法、儀表和采樣裝置；
c）??良好的微生物/衛(wèi)生作法和實(shí)驗(yàn)室安全；
d）??風(fēng)險(xiǎn)分析；
e）??采樣/監(jiān)控計(jì)劃的改變；
f）??表現(xiàn)欠佳時(shí)的再度培訓(xùn)；
g）??定期驗(yàn)證。
H．2．3??微生物控制及微生物污染控制程序
對(duì)于控制環(huán)境內(nèi)所有人員、負(fù)責(zé)管理和環(huán)境控制計(jì)劃一般操作的人個(gè)，包括采樣人員和實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員，正式的培訓(xùn)計(jì)劃應(yīng)有：
a）??微生物學(xué)的基本原理；
b）??應(yīng)用微生物學(xué)、衛(wèi)生和流行病學(xué)的基本原理；
c）??良好的雇員消毒技術(shù)和預(yù)防措施；
d）??環(huán)境控制過(guò)程原理；
e）??微生物采樣技術(shù)；
f）??微生物危害分析的基本原理；
g）??理解生物污染的目標(biāo)、報(bào)警和行動(dòng)限量；
h）??趨勢(shì)分析原理；
i）??各項(xiàng)要求實(shí)驗(yàn)方法和用于幫助細(xì)菌識(shí)別的專門化培訓(xùn)；
j）??清楚的報(bào)告編寫。
H．3??培訓(xùn)確認(rèn)
確認(rèn)應(yīng)向用戶保證培訓(xùn)已進(jìn)行并制作了文件。對(duì)人員已進(jìn)行了指定系統(tǒng)培訓(xùn)的確認(rèn)應(yīng)根據(jù)規(guī)程進(jìn)行。因此培訓(xùn)確認(rèn)應(yīng)強(qiáng)調(diào)規(guī)程實(shí)施的細(xì)節(jié)。為了便于確認(rèn)雇員在與其工作相關(guān)規(guī)程方面的表現(xiàn)，建議以系統(tǒng)的方式實(shí)施培訓(xùn)確認(rèn)。
H．3．1??評(píng)估手段
培訓(xùn)確認(rèn)規(guī)程寫好后，需設(shè)計(jì)評(píng)價(jià)手段以確認(rèn)培訓(xùn)的有效性。對(duì)雇員表現(xiàn)的評(píng)價(jià)要對(duì)照由實(shí)驗(yàn)室/部門管理人員/監(jiān)督或培訓(xùn)機(jī)構(gòu)制定的表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)?？捎糜诖_認(rèn)表現(xiàn)的各種“測(cè)量手段”有：
a）??對(duì)照培訓(xùn)學(xué)習(xí)目的的評(píng)價(jià)；
b）??筆試；
c）??評(píng)價(jià)反應(yīng)能力；
1）??相關(guān)領(lǐng)域的案例研究；
2）??問(wèn)題；
3）??與規(guī)程有關(guān)的情形。
d）??對(duì)有關(guān)堆積口頭詢問(wèn)的反應(yīng)；
e）??測(cè)試。
1）????盲試樣；
2）????熟練測(cè)試樣；
3）????以前分析試樣。
在進(jìn)行評(píng)估前，各參加人須得到成就可接受水平的預(yù)定及驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。此外，評(píng)價(jià)與確認(rèn)手段就公布并交各參加人審議。
H．3．2??文件
培訓(xùn)結(jié)果文件可能得到不同系統(tǒng)的支持。雇員記錄的制作與格式上的一致性對(duì)于培訓(xùn)確認(rèn)是很重要的。
確認(rèn)文件應(yīng)符合法規(guī)和認(rèn)可要求與標(biāo)準(zhǔn)，及組織（雇員）和/或部門政策，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室/部門服務(wù)與指導(dǎo)原則。
H．3．2．1??記錄保留
記錄還應(yīng)以清楚的書(shū)面形式保留，記有以下內(nèi)容：
a）??受訓(xùn)人身份；
b）??培訓(xùn)負(fù)責(zé)人；
c）??記錄存放處及掌管人；
d）??記錄可以銷毀的時(shí)間；
e）??審定記錄的時(shí)間與方法。
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文獻(xiàn)
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前言
ISO為全球各國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化團(tuán)體（ISO會(huì)員團(tuán)體）的聯(lián)合會(huì)。其國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)工作的開(kāi)展一般是由ISO各技術(shù)委員會(huì)進(jìn)行，每個(gè)會(huì)員團(tuán)體，如對(duì)技術(shù)委員會(huì)的某一課題感興趣，均有權(quán)成為該技術(shù)委員會(huì)的代表。任何與ISO保持聯(lián)系的國(guó)際組織，無(wú)論是政府的，還是非政府的，都可以參加此項(xiàng)工作。ISO與國(guó)際電氣技術(shù)委員會(huì)（IES）在電氣技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化的各領(lǐng)域進(jìn)行緊密合作。
國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)草案經(jīng)技術(shù)委員會(huì)認(rèn)可后，送各會(huì)員團(tuán)體傳閱，以待表決。草案作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)頒布至少需要75%的會(huì)員罷休對(duì)其投贊成票。
國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 14698-3由ISO/TC209技術(shù)委員會(huì)（潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境）提出。
ISO14698在潔凈室及其相關(guān)受控環(huán)境的總標(biāo)題下，由以下各部分組成：
—-第1部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—總則
—-第2部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)定和說(shuō)明
—-第3部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—對(duì)載有生物污染的濕性培養(yǎng)基或生物膜之惰性表面進(jìn)行清洗和/或消毒過(guò)程的效率測(cè)量方法
用戶注意，第1到第3部分的標(biāo)題是出版第1部分時(shí)采用的工作標(biāo)題。如果其中一項(xiàng)或多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)被從工作計(jì)劃中刪除，則需對(duì)其余的標(biāo)題重新加以編號(hào)。
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1?范圍
本ISO標(biāo)準(zhǔn)給出的基本指導(dǎo)原則和方法要求適用?廠對(duì)各種微生物數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)定
所選系統(tǒng)規(guī)定的危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)對(duì)有生命粒子采樣得到的生物污染數(shù)據(jù)進(jìn)行估計(jì)。
ISO 14698的本部分應(yīng)與適宜的其它ISO 14698系列標(biāo)準(zhǔn)及其附件一起使用。
本標(biāo)準(zhǔn)不適用于測(cè)試確定有生命單位的微生物計(jì)數(shù)技術(shù)的性能：如應(yīng)該定期使用的板式汁數(shù)法適用的標(biāo)準(zhǔn)是ISOE 30[3l。
2??參考標(biāo)準(zhǔn)
下述參考標(biāo)準(zhǔn)包含在本文中引用的構(gòu)成ISO標(biāo)準(zhǔn)的條款。指明的版本在出版時(shí)均是有效的。所有版本均可進(jìn)行修改。鼓勵(lì)I(lǐng)SO的協(xié)議各方探討使用下述最新版本標(biāo)準(zhǔn)文件的可能性。
ISO和LEC的成員保存有當(dāng)前有效的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。
ISO 8402：質(zhì)量管理和質(zhì)量保證——詞匯
ISOE 30：分析數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)：微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制
ISO 3534-I? (1993年12月)：統(tǒng)計(jì)——詞匯和符號(hào)——第1部分：概率和通用統(tǒng)計(jì)術(shù)語(yǔ)
ISO 3534-2? (1993年12月)：統(tǒng)計(jì)——詞匯和符號(hào)——第2部分：統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制
IS0 7218：? 1996??微生物——微生物檢驗(yàn)通則
3??術(shù)語(yǔ)
為進(jìn)一步闡明本標(biāo)準(zhǔn)中使用的術(shù)語(yǔ)，在潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境系列文件的標(biāo)準(zhǔn)定義部分增加了補(bǔ)充說(shuō)明性的詞匯(如，微生物、生物污染、有生命的)。下列定義適用于本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：
3．1
行動(dòng)限值(actionlevel(s))
由用戶按規(guī)定設(shè)定的、受控環(huán)境內(nèi)的微生物級(jí)別
注如超過(guò)了行動(dòng)限值，要求立即研究糾正措施，并馬上采取行動(dòng)。
3．2
空氣生物污染(aerobiocontaminatlon)
空氣中和／或氣體中由有生命粒子造成的污染
3．3
警報(bào)限值(sleftlevel(s))
由用戶按規(guī)定為受控環(huán)境設(shè)定的微生物限量。
注如超過(guò)了警戒級(jí)，應(yīng)調(diào)查研究，保證過(guò)程和／或環(huán)境處于控制之下
3．4
生物氣溶膠(bioaeros01)
在氣態(tài)環(huán)境中彌散的生物介質(zhì)(如有生命的粒子、過(guò)敏原、毒素或微生物原的生物性活性復(fù)合物)。
3．? 5
生物污染(biocontamination)
材料、器件、個(gè)體、表面、液體、氣體或空氣受有生命的粒子污染
3.6
潔凈室（CIeanroom)
室內(nèi)懸浮粒子濃度受控的房間。房間的建造和使用方式都要盡可能減少室內(nèi)引入、產(chǎn)生和滯留粒子，室內(nèi)其它相關(guān)的參數(shù)(如溫度、濕度和壓力)按要求控制
3．7
接觸裝置(contactdevice)
特殊設(shè)計(jì)的、用于裝放已滅菌的培養(yǎng)基，帶有可維護(hù)表面
3．8
接觸皿(contactplate)
容器是剛性碟子的接觸裝置
3．9
控制點(diǎn)(controlpoint)
受控環(huán)境中的任意降低到合格的限值在該點(diǎn)處采取微生物措施，防止生物污染的危害，并把其消除
3．10
糾正措施(correcfiveaction(s))
生物污染監(jiān)測(cè)結(jié)果表明超過(guò)了警報(bào)限值或行動(dòng)限值時(shí)應(yīng)采取的措施
3．11
估計(jì)(estimation)
根據(jù)對(duì)樣品的觀察，把數(shù)值賦予選定作為采樣群體之統(tǒng)計(jì)模型的分布參數(shù)的工作過(guò)程(1SO3534-1：1993)
3．12
估計(jì)值(estimate)
經(jīng)過(guò)估計(jì)得出的估計(jì)值(1S03534-1
3．13
估計(jì)量(eatimator)
用于估計(jì)群體參數(shù)的統(tǒng)計(jì)量(1S03534-：
3．14
評(píng)定(evaluation)
對(duì)數(shù)據(jù)值進(jìn)行鑒別的工作過(guò)程
3．15
危害(hazard)
任何對(duì)個(gè)體、環(huán)境、工藝或產(chǎn)品造成有害影響的生物、化學(xué)、物理組份或因素
3．16
碰撞(impact)
有生命粒子對(duì)一固體表面的碰撞
3．17
沖擊(implngement)
見(jiàn)液體分離
3．18
液體分離：撞擊（iquid trapping；）
3. 19
鑒定(qualification)
證明一個(gè)實(shí)體是否能滿足規(guī)定的要求的過(guò)程（實(shí)體：活動(dòng)或工藝、產(chǎn)品、組織或上述任何項(xiàng)的組合）（ISO 8402）
3. 20
危險(xiǎn)(risd)
一種有害物已確定的危害性后果
3. 21
沉降皿(settle plate)
指定敞開(kāi)一段規(guī)定時(shí)間的容器(如裝有已滅菌的培養(yǎng)基媒介的、規(guī)格適宜的培養(yǎng)皿)
3. 22
分層現(xiàn)象(stratification)
定群體分成在所研究的特性方面更具有同質(zhì)性的子群體或?qū)拥墓ぷ鬟^(guò)程
3. 23
拭子(swab)
經(jīng)過(guò)滅菌的收集裝置，對(duì)被采樣的微生物無(wú)毒性、無(wú)抑制作用，由大小適宜的特定材料構(gòu)成，裝在一固定裝置上
3．24
涂拭(swabbing)
用事先以萃取液(洗脫液)潤(rùn)濕的拭子涂拭一規(guī)定面積的表面，以此方法取樣來(lái)檢測(cè)有生命的粒子
3. 25
目標(biāo)限值(target level(s))
由用戶為其自身目的按規(guī)定設(shè)定的微生物限值
3.26
認(rèn)證(validation)
通過(guò)準(zhǔn)備并檢驗(yàn)客觀證據(jù)來(lái)確認(rèn)達(dá)到了對(duì)特定用途的特殊要求
3．27
活粒子(viable particle)
能夠繁殖、產(chǎn)生可表明的增長(zhǎng)的、孤立的、自然生成的微生物或群集的微生物
3．28
活單位(viable unit(VUI)
一個(gè)或多個(gè)聚集在一起的活粒子，作為一個(gè)單位來(lái)計(jì)數(shù)。當(dāng)以在瓊脂培養(yǎng)基上的菌落來(lái)計(jì)算VUs時(shí)，通常把它們稱作菌落成型單位(CFU)
3.29
危險(xiǎn)區(qū)(zone at risk)
按地理位置確定、并劃定界限的空間，在其中的個(gè)體、產(chǎn)品或材料(或上述任何項(xiàng)的組合)尤其易受生物污染
4???生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)定和說(shuō)明
對(duì)危險(xiǎn)區(qū)進(jìn)行微生物監(jiān)測(cè)得出的生物污染數(shù)據(jù)在進(jìn)行估計(jì)和評(píng)定時(shí)，應(yīng)把下述因素考慮在內(nèi)：
a)??收集的數(shù)據(jù)的標(biāo)識(shí)；
b)??要求的定量資料量；
c)??方法(如，統(tǒng)計(jì)規(guī)程的選擇、相關(guān)性分析、人工智能等)
d)??數(shù)據(jù)分層(見(jiàn)4．2．4)：
e)??生物污染監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的表示法；
f)??有生命的粒子的定量和定性的確定；
8)??分析方法的可靠性的潛在問(wèn)題；
h)??時(shí)間趨勢(shì)(趨勢(shì)分析)：
i)??控制圖表(見(jiàn)4．2．4和4．2，6)：
考慮到下述兩種情況，建議生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)定分兩個(gè)階段進(jìn)行：
a)??基本組分，包括初級(jí)監(jiān)測(cè)階段(見(jiàn)4．1)：
b)? (常規(guī))監(jiān)測(cè)時(shí)對(duì)生物污染數(shù)據(jù)的估計(jì)和評(píng)定(見(jiàn)4．2)。
4.1??生物污染數(shù)據(jù)的估計(jì)、說(shuō)明和報(bào)告：
4．1初始監(jiān)測(cè)階段生物污染數(shù)據(jù)的估計(jì)和評(píng)定
4．1．1確定生物污染的存在和影響
確定生物污染的存在和影響要求利用直接和間接的微生物監(jiān)測(cè)方法分幾步完成。為保證可靠的估計(jì)生物污染數(shù)據(jù)，至少應(yīng)把下述重要因素考慮在內(nèi)：
a)??采樣：采樣材料要有適當(dāng)數(shù)量和同質(zhì)性，樣品稀釋液要有適當(dāng)精度(見(jiàn)IS014698-1)：
b)??活粒子各種組分、隨時(shí)間的可變性、(不斷增長(zhǎng)的阻力)的影響，或?qū)π掖娴暮蛷?fù)原的活粒子的壓力和傷害作用；
c)??來(lái)自受控環(huán)境內(nèi)和/或危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)不同采樣點(diǎn)的生物污染數(shù)據(jù)(見(jiàn)IS014698-1)：
d)??培養(yǎng)技術(shù)和／或估計(jì)方法：
e)??分析方法(定量和／或質(zhì)定的估計(jì))的選擇及直接和間接微生物檢驗(yàn)之間關(guān)系的程度。
4．1．2生物污染數(shù)據(jù)的收集
為設(shè)定初始工作限值，通常在初始監(jiān)測(cè)階段對(duì)受控環(huán)境中活粒子進(jìn)行較頻繁的測(cè)定。隨著對(duì)生物污染的了解不斷深入，測(cè)定頻率也可以降低。
4．1．3??目標(biāo)、警報(bào)和行動(dòng)限值
用戶應(yīng)該對(duì)每個(gè)危險(xiǎn)區(qū)就其應(yīng)用領(lǐng)域的特殊要求和通過(guò)實(shí)施采樣計(jì)劃得到的初始數(shù)據(jù)結(jié)果確定適當(dāng)?shù)哪繕?biāo)限值，然后據(jù)此制定出適當(dāng)?shù)木瘓?bào)和行動(dòng)限值。根據(jù)得到的微生物監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，可能需要適當(dāng)?shù)卣{(diào)整上述限值。
4．1．4?認(rèn)證
每種常規(guī)使用的計(jì)數(shù)技術(shù)都應(yīng)進(jìn)行認(rèn)證。對(duì)估計(jì)方法進(jìn)行認(rèn)證可以定量和定性地掌握主要的生物污染情況。
認(rèn)證計(jì)數(shù)方法應(yīng)該考慮下述情況：
a)??有關(guān)的活粒子：
b)??預(yù)期的活粒子數(shù)目(如濃縮或稀釋樣品的要求)：
c)??所選媒介支持生長(zhǎng)的能力和保證復(fù)原的能力：
d)??所選培養(yǎng)基的條件能否支持在所選培養(yǎng)基媒介內(nèi)／上充分生長(zhǎng)；
e)??所選孵化時(shí)間能否足以可靠地預(yù)計(jì)樣品中的生命計(jì)數(shù)：?
f)??能否利用代謝活動(dòng)來(lái)估計(jì)活單位。
認(rèn)證微生物技術(shù)的指導(dǎo)說(shuō)明見(jiàn)[13；14]。
4．1．5??糾正行動(dòng)(變化控制)
采取的行動(dòng)應(yīng)該包括：
a)??清除嚴(yán)重的和/或系統(tǒng)性的誤差
b)??評(píng)定發(fā)生的變化：
c)??制定修正的方法的恢復(fù)效率：
d)??認(rèn)證設(shè)備：
e)??證明及文件。
4. 1. 6??記錄
對(duì)方法、儀表、內(nèi)部審計(jì)的常規(guī)或定期的檢查、原始的觀察、計(jì)算、數(shù)據(jù)和最終的報(bào)告的記錄等都應(yīng)存檔保管。記錄必須包括參與采樣、制備、測(cè)試、評(píng)定和報(bào)告的人員的身份、簽字。草簽或標(biāo)記的記錄應(yīng)該保管好，并且適當(dāng)?shù)母隆?/p>
報(bào)告將按要求分發(fā)。其中可包括傳真、郵件和/或電子數(shù)據(jù)傳輸。
對(duì)數(shù)據(jù)/記錄包括計(jì)算機(jī)中的文件應(yīng)提供適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)。
4．2??常規(guī)監(jiān)測(cè)階段生物污染數(shù)據(jù)的估計(jì)和評(píng)定
常規(guī)監(jiān)測(cè)內(nèi)容有采樣、樣品追蹤、數(shù)據(jù)收集、數(shù)據(jù)記錄、數(shù)據(jù)評(píng)定、微生物數(shù)據(jù)評(píng)定的統(tǒng)計(jì)表示和趨勢(shì)分析及控制圖表。
4．2．1??采樣和樣品追蹤
有效的生物污染數(shù)據(jù)最重要的步驟，即采樣的資料可見(jiàn)ISO 14698-1。此外，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有可靠適用的規(guī)程，對(duì)從接收到分析中的樣品進(jìn)行明確的標(biāo)識(shí)和處理，并且能保證結(jié)果和樣品相對(duì)應(yīng)，放置無(wú)誤。
4．?2．2??數(shù)據(jù)收集
采樣計(jì)劃應(yīng)該遵循ISO14698-1的通則。
為避免收信到有差錯(cuò)的數(shù)據(jù),至少應(yīng)該考慮到下述情況:
a)??特殊的應(yīng)用;
b)??識(shí)別特定的數(shù)據(jù)參數(shù)；
c)??過(guò)程／系統(tǒng)中的數(shù)據(jù)收集點(diǎn);
d)??檢測(cè)限制；
e)??測(cè)試系統(tǒng)的靈敏度；
f)??工作和工作數(shù)據(jù)的收集。
4．2．3數(shù)據(jù)記錄
為保證在規(guī)定的期間內(nèi)可隨時(shí)得到關(guān)于測(cè)試的各種資料,應(yīng)該編制并實(shí)施數(shù)據(jù)記錄和處理的明確規(guī)程，其中應(yīng)包括下述各項(xiàng)：
a)??原始數(shù)據(jù)：
b)??記錄中的資料類型和清單；
c)??實(shí)驗(yàn)室文件或計(jì)算機(jī)化的記錄的標(biāo)記和放置地點(diǎn)：
d)??使用工作手冊(cè)、工作表格或計(jì)算機(jī)或其他手段記錄各種觀察結(jié)果、計(jì)算或其他有關(guān)資料：
e)??突出顯示樣品異常值的標(biāo)準(zhǔn)方法：
f)??對(duì)結(jié)果改善情況的審查跟蹤：
g)??如重復(fù)進(jìn)行分析，必須明確規(guī)定出合格的數(shù)值；
h)??必須遵循的關(guān)于記錄、檢查、糾正、簽署及會(huì)簽觀察結(jié)果、計(jì)算和報(bào)告的規(guī)程;
i)??關(guān)于持續(xù)說(shuō)明的建議；
j)??特定的、法律的或規(guī)章的要求；
k)??適用于對(duì)目標(biāo)限值有作用的應(yīng)用領(lǐng)域的要求。
4．2．4．?dāng)?shù)據(jù)評(píng)定
在對(duì)生物數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算之前，特別是記錄有許多觀察結(jié)果時(shí)，需要對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行編排壓縮，使主要特性明確顯示出來(lái)(數(shù)據(jù)分層)?？梢圆捎枚ㄐ苑椒?，或把測(cè)量結(jié)果分組，繪成頻率表和圖表，或用描述統(tǒng)計(jì)法實(shí)現(xiàn)。適合用統(tǒng)計(jì)法的數(shù)據(jù)可以是單個(gè)數(shù)據(jù)的測(cè)量結(jié)果，或是擁有特定屬性的成份數(shù)之計(jì)數(shù)。
在各次測(cè)量中：
a)??要有文件來(lái)闡述制定方法的手段和確認(rèn)方法的統(tǒng)計(jì)技術(shù)；
b)??方法應(yīng)該已經(jīng)在公認(rèn)的科學(xué)專刊上發(fā)表過(guò)：
c)??應(yīng)對(duì)如何更換測(cè)量方法進(jìn)行說(shuō)明。
4．2．5??微生物數(shù)據(jù)評(píng)定之統(tǒng)計(jì)表示法
可以采取有效的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)所選系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)量控制。統(tǒng)計(jì)技術(shù)的核心是外推法，把樣品推廣到采樣危險(xiǎn)區(qū)的微生物群體。由于樣品表示的污染群體可能不精確，所以外推法本身自有一定的危險(xiǎn)。因此，如果正確地進(jìn)行監(jiān)測(cè)和評(píng)定，這種危險(xiǎn)可以量化，并通過(guò)概率采樣和統(tǒng)計(jì)法把其降到可以接受的程度(如，[4]；[9—11]：ISO 3534-2：1993)。
注??建議采用多種統(tǒng)計(jì)方法來(lái)說(shuō)明和評(píng)定統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。基于統(tǒng)計(jì)評(píng)定法和說(shuō)明資料的復(fù)雜性，本標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)監(jiān)測(cè)和鑒定用統(tǒng)計(jì)方法的選擇和使用進(jìn)行任何闡述。
4．2．6??趨勢(shì)分析和控制圖表表示
取自單一樣品的數(shù)據(jù)通常意義不大：另外，微生物監(jiān)測(cè)技術(shù)可能有嚴(yán)重的缺陷，會(huì)導(dǎo)致很高的微生物數(shù)據(jù)變化率。??因此，用圖表表示在一段給定時(shí)間內(nèi)收集的數(shù)據(jù)會(huì)有助于區(qū)分采樣變化與實(shí)際趨勢(shì)，或在估計(jì)值仍在規(guī)定的范圍之內(nèi)時(shí)能指示出發(fā)生的重大變化。
應(yīng)該用控制圖表法提供一客觀的、統(tǒng)計(jì)上有效的手段[9)來(lái)鑒定危險(xiǎn)區(qū)的質(zhì)量。特別是適用于監(jiān)測(cè)的方法。在進(jìn)行鑒定時(shí)(標(biāo)準(zhǔn)IS014698—1中的原則4f)，可以用批次驗(yàn)收采樣作為另外一種質(zhì)量控制技術(shù)[7)。如果是用“Shewhart’’控制圖表的方法(1SO 3534-2：1993)來(lái)繪制圖表，也可以用基于范圍(BOR)或基于累計(jì)總量圖(CSC)的控制圖表[7]來(lái)測(cè)量偏離估計(jì)值正常隨機(jī)分布的情況，并突出顯示出重大的不符合技術(shù)性能的結(jié)果[6-91。
4．3??生物污染數(shù)據(jù)的說(shuō)明和估計(jì)
給定樣品中沒(méi)有微生物，不一定表明正在凋查的生物污染事件中沒(méi)有微生物污染。可能在采樣時(shí)危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)恰巧不存在活粒子。反言之，活粒子的存在可能具有積極的意義，即反應(yīng)出微生物是從一個(gè)非采樣區(qū)進(jìn)入了出“事故”的危險(xiǎn)區(qū)。制定適當(dāng)受控的、定期檢驗(yàn)的微生物監(jiān)測(cè)計(jì)劃可以降低不確定程度。另外，在估計(jì)規(guī)程中也應(yīng)反應(yīng)出下確定程度，
4. 4??認(rèn)證
為了確定監(jiān)測(cè)的效率和分析方法的效率,應(yīng)該定期以文件的形式對(duì)結(jié)果進(jìn)行認(rèn)證?？梢杂冒幢O(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算空氣、表面、織物和液體的平均活粒子計(jì)數(shù)（和適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)偏差）的方法來(lái)檢驗(yàn)危險(xiǎn)區(qū)的目標(biāo)限值、警報(bào)限值和行動(dòng)限值。
4．5??不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果
每次當(dāng)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果不符合技術(shù)規(guī)格的情況（事故）發(fā)生時(shí)，都要求進(jìn)行評(píng)定和/或認(rèn)證。評(píng)定的目的是決定是否能把不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果認(rèn)定為真實(shí)結(jié)果。此處認(rèn)證的目的是確認(rèn)不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果是否源于實(shí)驗(yàn)室的差錯(cuò)。
4．5．1??不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果的評(píng)定
初始監(jiān)測(cè)階段的限值是臨時(shí)性的，可能會(huì)隨著過(guò)程監(jiān)測(cè)的進(jìn)展而變化。這時(shí)，不符合當(dāng)前限值的結(jié)果可以被看作是真實(shí)結(jié)果，反應(yīng)出發(fā)生生物污染時(shí)真實(shí)的變化，并會(huì)促進(jìn)重新評(píng)定臨時(shí)性技術(shù)規(guī)定。對(duì)這種情況不要求作正式的認(rèn)證，但決定應(yīng)該是合理的，并要以文件記錄下來(lái)。
4．?6??數(shù)據(jù)認(rèn)證
應(yīng)按明確的規(guī)程認(rèn)證數(shù)據(jù)，然后才可報(bào)告。規(guī)程應(yīng)包括：
a)??書(shū)面的規(guī)程，由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員按此對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行審定；
b)??把數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)系統(tǒng)時(shí)，必須有對(duì)照數(shù)據(jù)庫(kù)檢查硬盤的規(guī)程；
c)??報(bào)告并介紹生物污染結(jié)果的系統(tǒng)；
d)??發(fā)放數(shù)據(jù)報(bào)告的明確規(guī)程。
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前言
ISO為全球各國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化團(tuán)體（ISO會(huì)員團(tuán)體）的聯(lián)合會(huì)。其國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)工作的開(kāi)展一般是由ISO各技術(shù)委員會(huì)進(jìn)行，每個(gè)會(huì)員團(tuán)體，如對(duì)技術(shù)委員會(huì)的某一課題感興趣，均有權(quán)成為該技術(shù)委員會(huì)的代表。任何與ISO保持聯(lián)系的國(guó)際組織，無(wú)論是政府的，還是非政府的，都可以參加此項(xiàng)工作。ISO與國(guó)際電氣技術(shù)委員會(huì)（IES）在電氣技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化的各領(lǐng)域進(jìn)行緊密合作。
國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)草案經(jīng)技術(shù)委員會(huì)認(rèn)可后，送各會(huì)員團(tuán)體傳閱，以待表決。草案作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)頒布至少需要75%的會(huì)員罷休對(duì)其投贊成票。
國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 14698-3由ISO/TC209技術(shù)委員會(huì)（潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境）提出。
ISO14698在潔凈室及其相關(guān)受控環(huán)境的總標(biāo)題下，由以下各部分組成：
—-第1部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—總則
—-第2部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)定和說(shuō)明
—-第3部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—對(duì)載有生物污染的濕性培養(yǎng)基或生物膜之惰性表面進(jìn)行清洗和/或消毒過(guò)程的效率測(cè)量方法
用戶注意，第1到第3部分的標(biāo)題是出版第1部分時(shí)采用的工作標(biāo)題。如果其中一項(xiàng)或多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)被從工作計(jì)劃中刪除，則需對(duì)其余的標(biāo)題重新加以編號(hào)。
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引言
本ISO標(biāo)準(zhǔn)是說(shuō)明以實(shí)驗(yàn)室法測(cè)試清洗或消毒操作效率的導(dǎo)則，可以單項(xiàng)操作或多項(xiàng)操作并用的方式應(yīng)用于惰性材料表面，這是指模擬在現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際粒子分布條件下，被污染利帶有微生物(可能形成生物膜)的潮濕表面，這些方法最終應(yīng)用于每一項(xiàng)產(chǎn)品和操作。本標(biāo)準(zhǔn)可應(yīng)用于上述應(yīng)用領(lǐng)域工業(yè)部門內(nèi)各締約方(供貨商和用戶)之間的合同關(guān)系中。
本標(biāo)準(zhǔn)不同于其它以病菌載體法測(cè)量接觸殺菌劑活性的標(biāo)準(zhǔn)，也不同于說(shuō)明表面懸浮消毒過(guò)程活性測(cè)量方法的標(biāo)準(zhǔn)，例如噴霧。應(yīng)理解到上述標(biāo)準(zhǔn)是闡述測(cè)量產(chǎn)品內(nèi)在活性的技術(shù)(雖然上述第2類標(biāo)準(zhǔn)中涉及氣溶膠發(fā)生器)，但本標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估測(cè)量下列一種或數(shù)種活性綜合效應(yīng)的方法，例如：
a)漂洗；
b)清洗；
c)消毒：
d)清洗與消毒同時(shí)采用：
e)生化作用；
g)機(jī)械作用。
本標(biāo)準(zhǔn)一般允許對(duì)一種過(guò)程采用一種方法識(shí)別(必要時(shí))，此過(guò)程足指微生物以特定方法被清除和清洗的過(guò)程，也是指對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基中含有的微生物被清除和清洗的過(guò)程，其它有關(guān)設(shè)備清洗和消毒的測(cè)量方法業(yè)已公布，其中有些已列入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)，可作進(jìn)一步查閱。
1??范圍
本ISO標(biāo)準(zhǔn)用于檢驗(yàn)與下列一種或數(shù)種作用相聯(lián)系的過(guò)程，如漂洗、清洗、消毒，清洗和消毒兼用、生化作用、機(jī)械作用等。本標(biāo)準(zhǔn)闡明在潔凈室和相關(guān)受控環(huán)境，對(duì)微生物繁殖污染(無(wú)論是否形成生物膜)的潮濕表面，進(jìn)行漂洗：和／或清洗：和／或消毒：和／或清洗、消毒兼用處理過(guò)程的效率測(cè)量原理。
在相應(yīng)的場(chǎng)合下，IS014698的本部分可延伸與IS014698系列的其它標(biāo)準(zhǔn)及其附錄配合使用。
2??規(guī)定參考文獻(xiàn)
在本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)中列入本文參考文獻(xiàn)的多項(xiàng)條款，也被下列標(biāo)準(zhǔn)所采納．在出版時(shí)，應(yīng)注明其有效版本。對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)均要加以檢查，應(yīng)鼓勵(lì)各國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議參與或?qū)で笫褂酶掳姹镜南铝袠?biāo)準(zhǔn)的可能性。IEc和ISO組織成員應(yīng)保存現(xiàn)行有效的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)登錄本。
IS0862：1984??表面活性劑——詞匯
3??定義
在本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，對(duì)微生物領(lǐng)域通用術(shù)語(yǔ)和表達(dá)式不再重新定義。應(yīng)用本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，采用下列定義：
3．1??生物膜(biofilm)
封閉在外微孔聚合物內(nèi)的微生物群體，并粘附在表面上。
注：生物膜會(huì)在非滅菌條件下，處理有機(jī)物質(zhì)的房間、設(shè)備和機(jī)器的潮濕表面上繁殖（即在醫(yī)藥、航天、或食品工廠、醫(yī)院、廚房、水管、通風(fēng)管道等處)。
3．2效率(efficiency)
清洗消毒的效率，或是單獨(dú)或綜合發(fā)揮這些作用的過(guò)程效率，它以10為底的對(duì)數(shù)表示的初始值與最終值的分離濃度之比(參閱3．7)，效率用E表示。
注：效率為無(wú)量綱，是數(shù)量級(jí)的相減數(shù)，也就是10的指數(shù)的濃度。
實(shí)例：
3. 3??清洗(cleaning)
對(duì)表面污染實(shí)施清除、溶解或驅(qū)散的作用。
注：可采用下列1種或數(shù)種方式實(shí)施清洗：
——物理化學(xué)的(洗滌作用)
——化學(xué)的(如氫氧化鈉)
——生化的(如酶)
——物理的(如用刷子刷或水管沖洗所產(chǎn)生的剪叨力)
3．4??過(guò)程(Proass)
為達(dá)到一定效果而規(guī)定的一組同時(shí)或順序?qū)嵤┑牟僮鳌?/p>
注：本標(biāo)準(zhǔn)用檢查下列一種或數(shù)種活動(dòng)有關(guān)的過(guò)程：沖洗，清洗,消毒，清洗和消毒兼用，生化作用和機(jī)械作用。
3．5??沖洗(rinsing)
利用液體，一般是水實(shí)施清洗作用
3．6??培養(yǎng)基(soiling)
在某些場(chǎng)合是溶解培養(yǎng)基的作用。
注：?本標(biāo)準(zhǔn)僅考慮濕培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含有的有機(jī)物質(zhì)，僅有對(duì)微生物富有營(yíng)養(yǎng)的物質(zhì)組成，并在水的活動(dòng)呈現(xiàn)時(shí)，能使微生物繁殖。
3．7??示蹤劑(tracer)
用于測(cè)量培養(yǎng)基繁殖數(shù)量的基材或有機(jī)微生物。
注l：為了測(cè)量過(guò)程的效率，在培養(yǎng)基中己繁殖的有機(jī)微生物，無(wú)論其是否形成生物膜，均可作為示蹤劑。
注2：通過(guò)清洗，沖洗的作用和生化或機(jī)械作用清除培養(yǎng)基或生物膜．消毒的目的限定為去除有機(jī)微生物或使有機(jī)微生物失去活性．因此，最理想的是在過(guò)程的整個(gè)效率方面，測(cè)量清除作用所產(chǎn)生的效率，以便與破壞(消滅)作用區(qū)別開(kāi)來(lái)。為此，可選用一種或多種附加示蹤劑，包括天然存在于培養(yǎng)基中或添加進(jìn)去，但應(yīng)不易被消除的示蹤劑．
4??測(cè)試方法
4．1??通則
本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用可分成下列各階段
4．1．1??測(cè)試培養(yǎng)基的應(yīng)用和(選項(xiàng))生物膜的形成
可將含有有機(jī)物和具有下列特性的培養(yǎng)基，以常規(guī)的和可重復(fù)的方式放置在測(cè)試表面上：
a)??測(cè)試培養(yǎng)基與被考察活動(dòng)的現(xiàn)場(chǎng)或應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)的滋生床相類似。
b)??測(cè)試培養(yǎng)基含有實(shí)用的微生物群落標(biāo)本，并能繁殖或形成生物膜。必要時(shí)，測(cè)試培養(yǎng)基將含有一種或多種附加示蹤劑。
c)??如有必要時(shí)，測(cè)試培養(yǎng)基可含有用于測(cè)量清洗效率的一種或多種附加示蹤劑。
d)??培養(yǎng)劑沉積后，在代表相應(yīng)使用場(chǎng)所的溫度和相對(duì)濕度的條件下，隨著時(shí)間的推移，應(yīng)在培養(yǎng)基表面被孵化，進(jìn)而使有機(jī)微生物繁殖并(有選擇地)粘附在表面并在合成的外微孔聚合物上，形成生物膜。
4．1．2過(guò)程的實(shí)施
應(yīng)采用與實(shí)際場(chǎng)所完全相同的方式實(shí)施此過(guò)程，必要時(shí)，可停止有機(jī)微生物的破壞，即刻實(shí)施該過(guò)程，但要采用中和劑。采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)措施，中和劑對(duì)被用的每種有機(jī)微生物應(yīng)予先被認(rèn)證。同時(shí)在執(zhí)行測(cè)試的相同期間應(yīng)重復(fù)被認(rèn)證。認(rèn)證的結(jié)果應(yīng)列入測(cè)試報(bào)告。
4．1．3??示蹤劑的計(jì)數(shù)
在示蹤劑由表面上除下來(lái)之后，采用一種或多種被認(rèn)證的技術(shù)對(duì)一種或多種示蹤劑進(jìn)行計(jì)數(shù)(尤其是在測(cè)試培養(yǎng)基上有機(jī)微生物或形成的生物膜。
4．2??測(cè)試設(shè)備和儀表
4．2，l??通用設(shè)備和儀表
在本文中對(duì)微生物學(xué)中通用的設(shè)備和儀表不再加以說(shuō)明。
4．2．2??測(cè)試培養(yǎng)基
測(cè)試培養(yǎng)基應(yīng)具有相應(yīng)使用場(chǎng)所的代表性，并能以最簡(jiǎn)便的方式得到實(shí)現(xiàn)。例如，在檢驗(yàn)肉類加工工業(yè)的清洗過(guò)程時(shí)，便采用肉糜；在乳酪工廠，便采用可溶解于相應(yīng)溶液中的乳酪。
4．2．3??測(cè)試培養(yǎng)基粘附器
測(cè)試培養(yǎng)基所采用的設(shè)備應(yīng)為用戶提供下列可能性：
——控制單位表面所承受的培養(yǎng)劑質(zhì)量
——可正常復(fù)制單位表面的上述質(zhì)量
如果采用液體測(cè)試培養(yǎng)基，應(yīng)使表面復(fù)蓋均勻的厚度。如果采用非液體測(cè)試培養(yǎng)基．則應(yīng)在恒速恒壓的條件下涂復(fù)表面。
4．2．4??微生物生物膜示蹤劑????，
為了測(cè)量過(guò)程效率，可采用在測(cè)試培養(yǎng)基中繁殖的有機(jī)微生物，或己形成的生物膜，在任何情況下，這些有機(jī)微生物應(yīng)：
——在相應(yīng)應(yīng)用場(chǎng)所具有代表性：
——應(yīng)取自與被檢的過(guò)程相適應(yīng)的那種類型的表面：
——在測(cè)試培養(yǎng)基中均質(zhì)擴(kuò)散
微生物示蹤劑可由一種或數(shù)種菌類或菌株組成。如果采用正式清單中未列出的菌株，則應(yīng)將其存放在測(cè)試實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。
4．2．5清洗示蹤劑
為了測(cè)量清洗作用對(duì)過(guò)程所產(chǎn)生的全部效率，可選用下列各項(xiàng)：
a)天然存在于培養(yǎng)基中的組成成份，采用與其相適應(yīng)的測(cè)量技術(shù)；
b)添加入測(cè)試培養(yǎng)基中的物質(zhì)(例如放射性指示劑)：
c)孢子狀有機(jī)微生物，優(yōu)先采用親溫細(xì)菌，例如硬脂親溫桿菌；
示蹤劑均質(zhì)地?cái)U(kuò)散于測(cè)試培養(yǎng)基中。
4. 2. 6??表面
污染表面的材料應(yīng)與現(xiàn)場(chǎng)評(píng)估過(guò)程中所采用的表面材料相一致。試樣的大小應(yīng)與選用的測(cè)試培養(yǎng)基粘附器相適應(yīng)，并要相當(dāng)小，便于裝進(jìn)超聲處理槽（參閱4.2.8）內(nèi)。將試樣并列排放在平整的表面上。受檢驗(yàn)的測(cè)試表面，即試樣的基片要既無(wú)裂縫，又不粗糙不平，不妨礙測(cè)試培養(yǎng)基的平滑應(yīng)用。
4．2．7??培養(yǎng)箱
培養(yǎng)箱應(yīng)是調(diào)溫的，并能調(diào)節(jié)基相對(duì)濕度。還可采取適當(dāng)手段使測(cè)試箱中的空氣受到水蒸汽飽和處理。
4. 2. 8??計(jì)數(shù)示蹤劑的回收
示蹤劑量的回收技術(shù)應(yīng)可以重復(fù)實(shí)施的。既能保證全部示蹤劑的回收，也可做到其已知?jiǎng)┝亢秃愣ū壤幕厥铡?/p>
如果可以的話，可采用超聲處理槽將測(cè)試培養(yǎng)劑從計(jì)數(shù)表面上分離下來(lái)。注意，但必須精確了介超聲處理槽：
——一個(gè)或多個(gè)超聲源的位置；
——建議采用既適用于超聲處理槽，又適用于放置試樣表面的容器的液體；
——建議采用適宜于上述容器的材料組分。
4．3??程序測(cè)試包括下列各步驟
選定的測(cè)試培養(yǎng)基與予期在測(cè)試中繁殖的有機(jī)微生物和選定的示蹤劑都要均勻混合。
4．3．2??測(cè)試培養(yǎng)基在測(cè)試表面上的涂復(fù)
采用粘附器將測(cè)試培養(yǎng)基均勻地涂復(fù)在試樣表面及基片上(參閱4．2．3)。均勻的涂復(fù)層既可用稱量涂復(fù)前后的試樣的方式鑒別，也可用肉眼檢查培養(yǎng)基表面的方式加以鑒別。
4．3．3??生物膜的孵化和形成試樣及其基片應(yīng)在適宜有機(jī)微土物生長(zhǎng)和生物膜形成的溫度和相對(duì)濕度的條件下，孵化一段時(shí)間，此處的有機(jī)微生物是指予期在測(cè)試中需要繁殖的品種或形成生物膜。
4．3．4??測(cè)試過(guò)程的實(shí)施
試樣及其基片經(jīng)孵化后要經(jīng)受測(cè)試過(guò)程。必要時(shí)，要利用中和劑停止滅菌劑的活化，隨后立即實(shí)施操作過(guò)程。將試樣毫不延誤地送至實(shí)驗(yàn)室逆行分聽(tīng)。
4．3??示蹤劑的計(jì)數(shù)
要采用有效的拄術(shù)對(duì)示蹤劑講行計(jì)數(shù)。
將示蹤劑從測(cè)試表面上分離下來(lái)之后，便可對(duì)示蹤劑進(jìn)行計(jì)數(shù)。在此情況下，應(yīng)將試樣表面送至實(shí)驗(yàn)室，就在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)得到繁殖的或形成生物膜的有機(jī)微生物連同示蹤劑，以適當(dāng)?shù)姆绞揭黄鸱蛛x下來(lái)。例如，將有機(jī)微生物浸入超聲處理槽內(nèi)的回收液罐內(nèi)，即可回收有機(jī)微生物，事先應(yīng)對(duì)選定的分離方法進(jìn)行論證，確定該方法對(duì)此類有機(jī)微生物無(wú)不良影響，并確信采用這種分離方法，能恰當(dāng)?shù)厥谷坑袡C(jī)微生物從表面上分離下來(lái)。
4．4??結(jié)果的表達(dá)
按照測(cè)得的效率表達(dá)測(cè)試結(jié)果，依據(jù)測(cè)試狀況，該效串為：
a)過(guò)程效率——利用選定繁殖或形成生物摸的微生物示蹤劑測(cè)得(參閱4．2．4)
b)??清洗效率——采用清潔示蹤刑法測(cè)得：
c)??滅菌效串——過(guò)程效率和清洗效率之差異，
4．5??測(cè)試報(bào)告
應(yīng)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)編制記錄報(bào)告，該報(bào)告至少應(yīng)包括下列各部分內(nèi)容：
a)實(shí)驗(yàn)室的鑒定：
b)過(guò)程的說(shuō)明；
1)所用產(chǎn)品的名稱；
2)使用模式：
c)實(shí)驗(yàn)條件，特別要說(shuō)明全部細(xì)節(jié)：
1)測(cè)試用培養(yǎng)劑：
2)有機(jī)微生物；
3)示蹤劑：
4)測(cè)試表面(材料和表面條件，試樣尺寸，培養(yǎng)基大小)，
5)培養(yǎng)劑技術(shù)及其重復(fù)性(單位表面的質(zhì)量，外觀)：
6)孵化（時(shí)間、溫度、相對(duì)濕度)：
7)計(jì)數(shù)技術(shù)，必要時(shí)，還包括有效的回收示蹤劑技術(shù)：
8)測(cè)試完成時(shí)要采取滅菌劑中和處理，但也要適合測(cè)試條件：
d)結(jié)果：
e)下列短浯：“讀者注意到這一事實(shí)，此處所列各項(xiàng)測(cè)試結(jié)果只能與在嚴(yán)格同條件下所取得的測(cè)試結(jié)果相對(duì)照”；
f)結(jié)論：
e)日期和簽署：
參考書(shū)目錄
l、Brouilland- Delattre，A.，Kobilinsky，A.，Cerf．0．1994．Mesure de l’efficacit’e desproced’s de nettoyage et de desinfection des surfaces ourertes，Le Lair，74，79—88，進(jìn)一步可參閱下列書(shū)刊<略>
原文鏈接：http://www.gxshunjiang.com/cleanroom-standards/wcsjcbz/723.html
