是臨床檢驗發(fā)展最快的專業(yè)
將是應(yīng)用最廣的專業(yè)
方興未艾的專業(yè)
將是最具活力的專業(yè)
一、臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)計
（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)計原則
（二）臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向
（三）工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)。
二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則
三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項
關(guān)鍵點一、防污染意識和措施
PCR技術(shù)最令人頭痛的問題是污染，極其微量的污染即可造成假陽性的結(jié)果。如果形成氣溶膠污染擴散，則可引起整個PCR實驗室的污染，處理起來非常棘手，甚至要關(guān)閉實驗室。
嚴(yán)格執(zhí)行各區(qū)功能劃分
1.試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
2.標(biāo)本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。
3.擴增區(qū)：cDNA合成、DNA擴增及檢測。
4.擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的進(jìn)一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。
● 人：操作者、科主任、實習(xí)進(jìn)修生、保潔員、患者（家屬）……
● 工作流程：單一流向
● 操作規(guī)程：認(rèn)真對待每一個細(xì)節(jié)
進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。
各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用
不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。
實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染
工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔（次氯酸鈉）。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效（可移動紫外燈，254nm波長），在工作完成后調(diào)至實驗臺上60～90cm內(nèi)照射。
實驗室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
注意事項：
試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) ，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。
由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在標(biāo)本制備區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。
必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在擴增區(qū)打開。
必須注意避免通過擴增產(chǎn)物分析區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。
不規(guī)范操作案例：
陽性對照和標(biāo)準(zhǔn)品與試劑混放
1.試劑：出入庫、質(zhì)檢、使用記錄、自配試劑、高壓消毒器械、結(jié)論、署名
2.儀器：（電子天平、低溫冷凍高速離心機、水浴鍋、移液器、離心機、超凈臺、混勻器等）使用情況記錄、運行狀況、結(jié)論（含校準(zhǔn)、維護(hù)保養(yǎng)、維修記錄，原始數(shù)據(jù)后附清單）
3.基本條件狀況：溫濕度、冰箱冷藏冷凍溫度（繪圖）、紫外燈照射累積時間（含超凈臺、傳遞窗和空氣消毒燈）、可移動紫外燈照射累積時間及照射范圍、結(jié)論、署名
4.標(biāo)本：驗收（含標(biāo)本性狀）、拒收及理由、特送標(biāo)本雙簽字
5.質(zhì)控（購買或自備、繪圖時 X、SD、CV）
6. 實驗過程記錄單/表：（見下方圖1、圖2）
7.報告：具體方法學(xué)（實時熒光定量/定性PCR）、標(biāo)本類型及性狀說明、唯一編號、陰陽性及定量、參考范圍/最低檢測限的確定、送檢時間（具體到時）、報告時間（具體到分）、備注（結(jié)果僅對此標(biāo)本負(fù)責(zé)。如有疑問，請于一周內(nèi)到PCR實驗室查詢?。?/p>
8.抱怨記錄：應(yīng)有時間、事件（項目）、接待人、處理方法、處理結(jié)果、處理人簽字確認(rèn)。
SOP文件的現(xiàn)行有效性
儀器的標(biāo)識維護(hù)保養(yǎng)
試劑及耗品的質(zhì)檢
.室內(nèi)質(zhì)控
1.管理文件部分：
工作制度
各種管理程序文件
各項工作程序及流程、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（ SOP）
各種表格（Tab-1……）
注意事項：
操作人員必須熟悉掌握本實驗室各項工作制度及SOP文件。當(dāng)新版文件核準(zhǔn)使用后，應(yīng)將原文件及時收回。
一定做到：
寫你所做的
做你所寫的
記你所做的
分析所記的
改你分析的
2.關(guān)于標(biāo)識：
實驗室名稱
各區(qū)名稱
入口出口說明
禁入標(biāo)識
單向說明及箭頭
生物防護(hù)標(biāo)識
生物防護(hù)垃圾袋
儀器運行綠色標(biāo)簽【注意：a.要比較明顯的被看見、先考慮顯而易見、再考慮美觀 ?b.綠：正常運行、黃：暫停、紅：停用】
重要儀器校驗和檔案標(biāo)簽
記錄筆、紙、抹布、加樣器、槍頭盒等辦公用品各區(qū)不同顏色標(biāo)識標(biāo)簽
柜、凳標(biāo)識
可移動儀器標(biāo)識
（可以）總的和各區(qū)的規(guī)章制度上墻、上門，重要儀器的操作流程卡上墻
1.儀器檔案
主要儀器應(yīng)有：
（a）放置地點；
（b）制造商名稱、型號、序號或其它唯一性標(biāo)識；
（c）儀器使用說明書或其復(fù)印件；
（d）校準(zhǔn)/檢測的日期和結(jié)果以及下次校準(zhǔn)和/或檢測的日期；
（e）迄今所進(jìn)行的維護(hù)和今后維護(hù)計劃的細(xì)節(jié)；
（f）損壞、故障、改裝或修理的歷史。
加樣器、溫度計、溫濕度計需出具計量局校正報告文件及復(fù)印件【可每品種有一套具備計量局的校正報告，并以此作為其它加樣器、溫濕度計的校正標(biāo)準(zhǔn)】【加樣器要有出廠編號、使用時間、校正記錄】
擴增儀需有儀器廠家提供進(jìn)口醫(yī)療器械銷售使用許可證，安裝服務(wù)單、裝機單，儀器說明書及復(fù)印件，專業(yè)技術(shù)人員維護(hù)校正報告和校正后參數(shù)，儀器維護(hù)后驗證記錄【用同一公司或校準(zhǔn)試劑或用自制質(zhì)控血清并記錄數(shù)值】
高速低溫冷凍離心機需出具計量局校正報告文件【轉(zhuǎn)速、溫度，校準(zhǔn)、擬下次校準(zhǔn)】
2.試劑檔案
醫(yī)療藥品生產(chǎn)許可證明，PCR試劑新藥證書，PCR試劑生產(chǎn)許可證，PCR試劑使用說明書，試劑廠商或銷售商的銷售許可證。【應(yīng)有廠家或廠家授權(quán)銷售商的紅色印章】
3.人員和技術(shù)檔案
實驗室主要負(fù)責(zé)人、實驗室技術(shù)人員名單
簡歷表、培訓(xùn)檔案，要求有實質(zhì)性文件【如每人的學(xué)歷證書及復(fù)印件、操作上崗證、科研成果（課題）、技術(shù)文章、獲獎證書等的復(fù)印件?！?/p>
根據(jù)實際情況及時進(jìn)行增補。
關(guān)鍵點五、學(xué)習(xí)培訓(xùn)
基礎(chǔ)知識：如何設(shè)定閾值線？如何調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)曲線？
專業(yè)新進(jìn)展
報告結(jié)果的解釋
正確對待臨床和患者等方面的抱怨
關(guān)鍵點六、其他
報告單的審核與簽發(fā)：編號唯一性、項目完整性、書寫完整性
操作者和審核者有無PCR上崗資質(zhì)？
檢測結(jié)果的單位：
參考值/最低檢測限：定量報告
……
作者：馮忠軍
單位：河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院檢驗科
