| 文件名：潔凈室浮游菌檢測標準操作規(guī)程 | 文件編號：ZL/SOP/ZK/02300 | |||||||
| 制定人： | 日期：?????年??月??日 | 文件類型：工作標準 | ||||||
| 審核人： | 日期：?????年??月??日 | 版???次：第一版 | ||||||
| 批準人： | 日期：?????年??月??日 | 印???數(shù)：共5份 | ||||||
| 生效日期：??????????????????????????年??月??日 | 頒發(fā)部門：綜合辦公室 | |||||||
| 分發(fā)至： 質量副總經(jīng)理、質量管理部、QC檢驗室、綜合辦公室 | ||||||||
| 變更記載 | 修訂號 | 修訂人 | 批準日期 | 生效日期 | 原 因 及 目 的 | |||
⒈ 目的：建立浮游菌檢測的標準操作程序，用以規(guī)范員工的檢測操作。
⒉ 范圍：適用于公司內部生產(chǎn)潔凈區(qū)內的浮游菌檢測工作
⒊ 責任：生產(chǎn)部、生產(chǎn)車間、質量管理部、QC檢驗室主任、檢驗員對本規(guī)程的執(zhí)行負責。
⒋ 檢測依據(jù)：GB/T16293—1996（醫(yī)藥工業(yè)潔凈室浮游菌的測試方法）。
⒌ 內容：
5.1?器具與材料
5.1.1?浮游菌采樣器
5.1.2?真空抽氣泵
5.1.3?培養(yǎng)皿
5.1.4?普通肉湯培養(yǎng)基
5.1.5?恒溫培養(yǎng)箱
5.2?測試步驟
5.2.1?測試前，儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
5.2.1.1?采樣品在進入被測前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被 測房間內。
5.2.1.2?用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。
5.2.1.3?采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束，于用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。
5.2.1.4?采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的及外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。
5.2.1.5?采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。
5.2.2?采樣程序
5.2.2.1?儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5分鐘，并調好流量、轉盤轉速。
5.2.2.2?關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調節(jié)采樣器縫隙高度。
5.2.2.3?置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵、轉動定時器，根據(jù)采樣量設定采樣時間。
5.2.3?培養(yǎng)
全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48小時。
每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
5.2.4?菌落計數(shù)
5.2.4.1?用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。
5.2.4.2?若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
5.3?注意事項
5.3.1?采樣器的采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造。
5.3.2?采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。
5.3.3?采樣管的長度應根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。
5.3.4?使用前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質、破損或污染的不能使用。
5.3.5?操作時應防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。
5.3.6?對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
5.3.7?由于細菌各類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或下面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
5.4?測試規(guī)則
5.4.1?測試狀態(tài)
5.4.1.1 ?浮游菌測試前，被測試潔凈室 （區(qū)）溫、濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內。
5.4.1.2?浮游菌測試前，被 測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。
5.4.1.3?測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài) 兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。
5.4.2?測試人員
5.4.2.1?測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。
5.4.2.2?靜態(tài)測試時，室內測試人員不得多于2人。
5.4.3?測試時間
5.4.3.1?對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于10分鐘后開始。
5.4.3.2?對非單向流，如10000級，及其以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘后開始。
5.4.4?浮游菌濃度計算
5.4.4.1?采樣點數(shù)量及其布置
5.4.4.1.1?最少采樣點數(shù)目：浮游菌測試的最少采樣點數(shù)目分為日常監(jiān)測及環(huán)境驗證兩種情況，具體情況見下表。
最少采樣點數(shù)目
| 面積 | 潔凈級別 | |||||
| 100 | 10000 | 100000 | ||||
| 驗證 | 監(jiān)測 | 驗證 | 監(jiān)測 | 驗證 | 監(jiān)測 | |
| <10 | 2～3 | 1 | 2 | 1 | 2 | —— |
| ≥10＜20 | 4 | 2 | 2 | 1 | 2 | —— |
| ≥20＜40 | 8 | 3 | 2 | 1 | 2 | —— |
| ≥40＜100 | 16 | 4 | 4 | 1 | 2 | —— |
| ≥100＜200 | 40 | —— | 10 | —— | 3 | —— |
| ≥200＜400 | 80 | —— | 20 | —— | 6 | —— |
| 400 | 160 | —— | 40 | —— | 13 | —— |
| 注：（1）表中的面積，對于100級的單向流潔凈室（包括層流工作臺），指的是送風口表面積；對于10000級、100000非單向流潔凈室，指的是房間面積。
（2）日常監(jiān)測的采樣點數(shù)目由生產(chǎn)工藝的關鍵操作點來確定。 |
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5.4.4.1.2??采樣點的位置
5.4.4.1.2.1?對每個100級潔凈操作區(qū)域（如層流罩、層流工作臺），可在離藥物敞開口處30cm處設測點。
5.4.4.1.2.2?對每個10000級潔凈工作區(qū)域（如藥物開口工作區(qū)）可在工作面處設測點。
5.4.4.1.2.3??送風口測點位置離開送風面30cm左右。
5.4.4.1.2.4?可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。
5.4.4.2?最小采樣量
采樣量根據(jù)日常檢測及環(huán)境驗證定，每次最小采樣量見下表。
最小采樣量
| 潔凈度級別 | 采樣量，Lㄍ次 | |
| 日常監(jiān)測 | 環(huán)境驗證 | |
| 100級 | 600 | 1000 |
| 10000級 | 400 | 500 |
| 100000級 | 50 | 100 |
5.4.4.3?采樣次數(shù)：每個采樣點一般采樣一次。
5.4.5?采樣注意事項
5.4.5.1?對于單向流功送風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。
5.4.5.2?布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口1m以上。
5.4.5.3?采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側。
5.5??記錄：對測試情況進行記錄（房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)等）。
5.6??結果計算
用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
每個測點的浮游菌平均濃度的計算見下式。
菌落數(shù)
平均濃度（個ㄍm3）=?—————
采樣量
